天然免疫分子人可溶性CD14、TLR4與腎臟移植免疫關(guān)系的臨床研究.pdf

1、本研究分為三章： 第一章：腎移植術(shù)后早期患者血清可溶性CD14的檢測 目的：了解腎移植術(shù)后早期血清sCD14水平變化規(guī)律，探討sCD14與腎移植術(shù)后急性排斥反應(yīng)的關(guān)系及其在臨床腎移植中的應(yīng)用價(jià)值。 方法：連續(xù)選取62例腎移植病例進(jìn)行研究，檢測術(shù)前1小時(shí)(day0)及術(shù)后第1天至術(shù)后第10天(day1～day10)血清sCD14水平，觀察腎功能恢復(fù)情況，根據(jù)術(shù)后2周內(nèi)臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室檢查、移植腎多普勒超聲檢查、對(duì)抗

2、排斥治療的反應(yīng)將病例分為排斥組和無捧斥組，將兩組病例的血清sCD14水平和血肌酐水平進(jìn)行比較。 結(jié)果：62例腎移植患者中發(fā)生排斥反應(yīng)16例，發(fā)生時(shí)間為術(shù)后第7.06±2.95天，無排斥反應(yīng)46例；術(shù)前(day0)兩組sCr水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。排斥組術(shù)后1～10天sCr水平均高于無排斥組，分析結(jié)果顯示，術(shù)后1～5天兩組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.01)，術(shù)后6～10天排斥組和無排斥組血肌酐水平分別為(174.31±77.09)μm

3、ol/lvs(112.13±38.51)μmol/l、(176.19±79.88)μmol/lvs(111.61±37.60)μmol/l、(208.44±.51.55)μmol/lvs(111.89±35.98)μmol/l、(204.19±71.51)μmol/lvs(104.35±33.06)μmol/l、(179.38±46.97)μmol/lvs(101.09±29.61)μmol/l，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；術(shù)前1

4、小時(shí)排斥組血清sCD14水平與無排斥組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.01)。排斥組術(shù)后1～4天血清sCD14表達(dá)水平高于無排斥組，分別為(15.39±6.07)μg/mlvs(9.85±3.86)μg/ml、(15.48±5.30)μs/mlvs(7.45±3.46)μg/ml、(12.11±4.46)μg/mlvs(5.83±3.40)μs/ml、(10.88±4.07)μg/mlvs(4.99±3.02)μg/ml，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)

5、意義(P＜0.01)，術(shù)后5～10天兩組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.01)。術(shù)后第1天，排斥組和無捧斥組血清sCD14水平均明顯高于術(shù)前(day0)，術(shù)后1～10天呈逐漸下降趨勢，到第10天時(shí)漸趨于穩(wěn)定，兩組sCD14水平差異逐漸縮小。 結(jié)論：我們首次對(duì)sCD14在腎移植術(shù)后的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律及其與腎移植急性捧斥反應(yīng)的關(guān)系進(jìn)行了研究，得出如下結(jié)論：(1)腎移植術(shù)后急性捧斥反應(yīng)直接影響早期移植腎功能恢復(fù)。(2)首次提出腎移植術(shù)后前4天內(nèi)

6、的sCD14水平可以作為預(yù)測急性排斥反應(yīng)的重要依據(jù)。(3)sCD14水平升高早于急性排斥反應(yīng)，可能提示其在移植排斥反應(yīng)的最初識(shí)別或者發(fā)動(dòng)階段參予了移植免疫過程。 第二章：腎移植術(shù)后早期患者外周血CD14陽性單核細(xì)胞中TLR4和CD80表達(dá)水平的檢測 目的：了解腎移植術(shù)后早期患者外周血CD14陽性單核細(xì)胞中TLR4和CD80表達(dá)水平的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，了解TLR4在腎移植急性排斥反應(yīng)中的作用和臨床應(yīng)用價(jià)值，探討TLR4參予腎移

7、植急性捧斥反應(yīng)的可能機(jī)制。 方法：對(duì)18例腎移植術(shù)后病例進(jìn)行了研究，采用三色標(biāo)記流式細(xì)胞術(shù)檢測了腎移植術(shù)后第1、4、7天外周血CD14陽性單核細(xì)胞TLR4和CD80的表達(dá)情況，同時(shí)觀察患者術(shù)后恢復(fù)情況，記錄患者每天血肌酐水平、肝功能、血像、尿量等變化，觀察術(shù)后2周內(nèi)發(fā)生急性捧斥反應(yīng)情況，根據(jù)有無捧斥反應(yīng)將18例病例分為捧斥組3例和無排斥組15例。對(duì)TLR4和CD80在發(fā)生急性捧斥反應(yīng)的病例和無排斥反應(yīng)的病例中的變化特點(diǎn)進(jìn)行了分析

8、，對(duì)TLR4和CD80參予腎移植急性排斥反應(yīng)機(jī)制及其在臨床腎移植急性捧斥反應(yīng)中的應(yīng)用價(jià)值進(jìn)行探討。 結(jié)果：(1)腎移植術(shù)后第1、4、7天外周血CD14陽性單核細(xì)胞中TLR4的表達(dá)在無捧斥組分別為(21.38±16.02)％、(13.38±7.90)％、(4.28±3.74)％，呈逐漸下降趨勢，術(shù)后第4天表達(dá)低于術(shù)后第1天表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，術(shù)后第7天表達(dá)低于術(shù)后第1天和第4天表達(dá)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.

9、05)；在捧斥組分別為(3.59±1.18)％、(21.5±20.54)％、(17.05±12.92)％，有不同程度升高。(2)腎移植術(shù)后TLR4在3例捧斥病例的表達(dá)變化情況：排斥病例1術(shù)后第4天和第7天TLR4表達(dá)持續(xù)增加，表達(dá)水平分別為前一次的2.30倍和2.32倍，于術(shù)后第11天排斥反應(yīng)不可逆轉(zhuǎn)，切除移植腎，病理證實(shí)為移植腎急性排斥反應(yīng)；排斥病例2術(shù)后第4天TLR4表達(dá)增加，為第1天的10.38倍，術(shù)后第5天行移植腎切除術(shù)，病理證

10、實(shí)為移植腎急性排斥反應(yīng)伴腎靜脈血栓形成，急性腎小管壞死。術(shù)后第7天TLR4表達(dá)水平下降，為第4天的0.17倍；排斥病例3術(shù)后第4天和第7天TLR4表達(dá)持續(xù)增加，表達(dá)水平分別為上次的3.48倍和2.14倍，經(jīng)過抗排斥治療，于第10天開始排斥反應(yīng)逆轉(zhuǎn)。(3)18例腎移植術(shù)后病例第1、4、7天外周血CD14陽性單核細(xì)胞中TLR4的表達(dá)比率情況：15例無排斥病例術(shù)后第4天與術(shù)后第1天的比值有13例小于1.0，2例接近2.0，術(shù)后第7天與第4天的

11、比值全部小于1.0，即TLR4的表達(dá)呈下降趨勢；排斥病例術(shù)后第4天與第1天比值大于2，術(shù)后第7天與第4天比值也大于2，即TLR4表達(dá)呈持續(xù)上升趨勢，其中排斥病例2在行移植腎切除術(shù)后TLR4表達(dá)下降，術(shù)后第7天與第4天比值為0.17。(4)腎移植術(shù)后第1、4、7天外周血CD14陽性單核細(xì)胞中CD80的表達(dá)情況：在無排斥組中，腎移植術(shù)后外周血CD14陽性單核細(xì)胞中CD80的表達(dá)呈下降趨勢，但各組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。在排斥組

12、中，CD80的表達(dá)則有不同程度的升高，但各組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。(5)腎移植術(shù)后3例排斥病例CD80表達(dá)的變化情況：排斥病例在急性排斥反應(yīng)發(fā)生過程中CD80表達(dá)明顯升高，其中病例2在移植腎切除術(shù)后CD80表達(dá)下降。 結(jié)論： (1)腎移植術(shù)后TLR4的表達(dá)變化規(guī)律與患者免疫反應(yīng)能力變化相一致，可以作為患者術(shù)后免疫狀態(tài)的監(jiān)測指標(biāo)，腎移植術(shù)后TLR4表達(dá)水平的持續(xù)增長可能預(yù)示著急性捧斥反應(yīng)的發(fā)生。(2)腎移植

13、術(shù)后外周血單核細(xì)胞CD80的表達(dá)變化規(guī)律與體內(nèi)免疫狀態(tài)相關(guān)，腎移植術(shù)后CD80表達(dá)水平的縱向監(jiān)測可能是了解患者免疫耐受狀況的有用指標(biāo)。 第三章：腎移植術(shù)后遠(yuǎn)期患者外周血單核細(xì)胞中CD14、TLR4和CD80表達(dá)水平的檢測 目的：了解腎移植術(shù)后遠(yuǎn)期患者外周血CD14陽性單核細(xì)胞中TLR4和CD80表達(dá)情況，了解TLR4在臨床腎移植慢性捧斥反應(yīng)中的作用及臨床應(yīng)用價(jià)值，對(duì)TLR4參予腎移植慢性排斥反應(yīng)的機(jī)制提供臨床依據(jù)。

14、 方法：對(duì)40例腎移植術(shù)后1～5年的病例進(jìn)行了研究，按腎功能情況分為移植腎功能正常組(24例)和臨床診斷為慢性排斥反應(yīng)的移植腎功能異常組(16例)，同時(shí)設(shè)20例健康正常人作為正常對(duì)照組。采用三色標(biāo)記流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血CD14陽性單核細(xì)胞TLR4和CD80的表達(dá)情況，對(duì)TLR4和CD80在移植腎功能異常組、移植腎功能正常組和正常對(duì)照組中的表達(dá)情況進(jìn)行分析，對(duì)TLR4和CD80在腎移植慢性排斥中的作用和臨床應(yīng)用價(jià)值進(jìn)行分析，對(duì)天然免疫相

15、關(guān)分子TLR4參予慢性移植排斥反應(yīng)的機(jī)理進(jìn)行探討。 結(jié)果：(1)TLR4在移植腎功能異常組、移植腎功能正常組和正常對(duì)照組外周血CD14陽性單核細(xì)胞中的表達(dá)分別為(11.99±8.19)％、(5.11±4.32)％、(15.61±14.01)％，TLR4在移植腎功能異常組的表達(dá)高于移植腎功能正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，TLR4在移植腎功能正常組的表達(dá)低于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(2)CD80在移

16、植腎功能異常組、移植腎功能正常組和正常對(duì)照組外周血CD14陽性單核細(xì)胞中的表達(dá)情況分別為(1.75±1.40)％、(0.87±0.57)％、(0.83±0.32)％，CD80在移植腎功能異常組中的表達(dá)高于移植腎功能正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，也高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(3)CD80在移植腎功能異常組、正常組和正常對(duì)照組外周血TLR4陽性單核細(xì)胞中的表達(dá)分別為(28.42±17.28)％、(19.5

17、8±18.00)％、(16.36±10.24)％，移植腎功能異常組TLR4陽性單核細(xì)胞中CD80的表達(dá)高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(4)40例腎移植術(shù)后患者(包括移植腎功能異常組和移植腎功能正常組)外周血CD14陽性單核細(xì)胞中TLR4和CD80的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系，Spearman相關(guān)系數(shù)rs=0.441，P=0.004。 結(jié)論：(1)TLR4參予了移植腎慢性捧斥反應(yīng)，TLR4參予移植腎慢性排斥反應(yīng)的機(jī)制可能