子癎前期患者分娩前后體內(nèi)硫酸皮膚素濃度的變化.pdf

1、妊娠期高血壓疾病(hypertensivedisordercomplicatingpregnancy)是產(chǎn)科常見(jiàn)并發(fā)癥之一，它嚴(yán)重威脅著母兒健康和生存。重度子癎前期的病理生理表現(xiàn)提示慢性的彌散性血管內(nèi)凝血(disseminatedintravascularcoagulationDIC)是該病重要的發(fā)病過(guò)程。有研究表明，正常晚期妊娠婦女存在血栓前狀態(tài)(pre-thrombosisstatePTS)，而子癎前期患者存在明顯的PTS，所以及早

2、、合理和有效的采取預(yù)防及治療措施，對(duì)于預(yù)防及治療子癎前期患者的慢性DIC病理生理過(guò)程有幫助，而且還可以預(yù)防胎盤(pán)早剝、胎盤(pán)梗死、胎兒生長(zhǎng)受限、反復(fù)流產(chǎn)、死胎和早產(chǎn)等嚴(yán)重的產(chǎn)科并發(fā)癥。 硫酸皮膚素(dermatansulfateDS)屬于天然的糖胺聚糖類藥物，廣泛分布于哺乳動(dòng)物的結(jié)締組織中。它是一種新型的抗血栓藥，DS的抗凝血酶作用途徑是通過(guò)肝素輔助因子Ⅱ(HC-Ⅱ)，而不是抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)，且可以完成人機(jī)體1/3的抗凝血酶活

3、動(dòng)。DS是HC-Ⅱ的特異性活化劑。作為一種新型的抗血栓藥物，具有良好的開(kāi)發(fā)前景。有文獻(xiàn)表明，DS和未分級(jí)肝素(UFH)合用有明顯的協(xié)同抗凝血作用，并且DS在一定濃度時(shí)，抗凝血活性隨著UFH濃度的增加而增加。 有文獻(xiàn)報(bào)道正常足月孕婦和胎兒體內(nèi)均存在一定濃度的硫酸皮膚素。本研究設(shè)計(jì)即是應(yīng)用發(fā)色底物法檢測(cè)存在血液高凝的妊娠期高血壓疾?。影G前期患者體內(nèi)硫酸皮膚素的抗凝活性，進(jìn)以觀察其水平是否與正常孕婦有差異，為應(yīng)用硫酸皮膚素治療血液高

4、凝的子癎前期患者提供一定的基礎(chǔ)，從而指導(dǎo)子癎前期患者的抗凝治療。 實(shí)驗(yàn)的材料與方法:一.研究對(duì)象正常妊娠晚孕婦女20名(組Ⅰ)作為對(duì)照組；實(shí)驗(yàn)組40名又分為兩組，其中輕度子癎前期晚孕婦女20例(組Ⅱ)，重度子癎前期晚孕婦女20例(組Ⅲ)，上述患者均為本院產(chǎn)科住院患者。子癎前期患者的診斷標(biāo)準(zhǔn)按照樂(lè)杰主編第六版婦產(chǎn)科學(xué)。實(shí)驗(yàn)對(duì)象均排除了肝功能異常，抽血前一月內(nèi)未使用抗凝藥物，無(wú)全身其它系統(tǒng)基礎(chǔ)疾病。上述患者的年齡孕周無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異

5、。所有患者均被告之且同意抽取靜脈血。 二.材料與方法1材料1.1試劑：皂土(Sigma公司)，純化人α凝血酶(HaematologicTechnologies公司)，發(fā)色底物CBS34.47(法國(guó)Stago公司)，純化人肝素輔助因子Ⅱ(HaematologicTechnologies公司)，硫酸皮膚素(Sigma公司)，硫酸軟骨素ABC降解酶(法國(guó)Stago公司)，50％冰醋酸(沈陽(yáng)第一化學(xué)試劑廠)。 1.2儀器：電子秤

6、，攪拌棒，試管，加樣器，水育箱，離心機(jī)，酶標(biāo)儀(405nm)。 2方法2.1標(biāo)本采集：分別取正常妊娠及輕、重度子癎前期患者剖宮產(chǎn)產(chǎn)前24小時(shí)內(nèi)及產(chǎn)后48～72小時(shí)空腹靜脈血2.5ml，3.8％枸櫞酸鈉抗凝管收集，6小時(shí)內(nèi)進(jìn)行下列操作：2000g離心15分鐘，取上層血漿，于-70℃冰箱貯存。 2.2血漿DS抗凝活性測(cè)定：2.2.1標(biāo)本測(cè)定：采用發(fā)色底物法。取凍存的血漿標(biāo)本常溫下自然融化，分別加入等體積的50g/L的醫(yī)用皂土

7、，混勻，2000g/min離心15分鐘，37℃取上清，抽取100μl；加入0.026u/ml純化的人肝素輔助因子Ⅱ100μl，37℃水育2分鐘；加入6NIHU/ml的凝血酶100μl，37℃水育2分鐘；加入0.16μmol/ml的CBS34.47100μl，37℃水育2分鐘；加入50％的冰醋酸100μl終止反應(yīng)；酶標(biāo)儀(波長(zhǎng)405nm)下讀取OD值。所有的經(jīng)皂土處理的血漿標(biāo)本在進(jìn)行其它分析前用硫酸軟骨素ABC降解酶(最終濃度0.33U/

8、ml)在37℃下作用1小時(shí)確保反應(yīng)中起作用的是硫酸皮膚素而不是肝素或硫酸乙酰肝素，因?yàn)檫@兩者在反應(yīng)系的血漿中也都是有活性的。 2.2.2正常標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：電子秤量取DS100μg加入到1ml生理鹽水中，分別取0.01ml的DS液，加入到0.49ml、0.66ml、0.99ml、1.99ml、9.99ml的生理鹽水中，得到濃度分別為2μg/ml，1.5μg/ml，1.0μg/ml，0.5μg/ml，0.1μg/ml濃度的DS，之后

9、處理方法同上，讀取OD值制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。 三.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS11.5軟件進(jìn)行直線相關(guān)回歸分析得出標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程，求出相對(duì)應(yīng)DS濃度。對(duì)三組60對(duì)數(shù)值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，組間比較采用方差分析，組內(nèi)比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，得出統(tǒng)計(jì)結(jié)果。P＜0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異，P＜0.01認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性差異。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果:1.硫酸皮膚素的標(biāo)準(zhǔn)曲線采用濃度分別為0.1μg/ml，0.5μg/ml，1.0μg/ml，1.5μg/ml

10、，2.0μg/ml濃度的DS進(jìn)行上述過(guò)程的實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)到相應(yīng)的OD值，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)后發(fā)現(xiàn)DS與凝血酶發(fā)光度對(duì)數(shù)值之間呈直線關(guān)系。 2.血漿DS濃度測(cè)定產(chǎn)前，組Ⅲ硫酸皮膚素含量比組Ⅱ和組Ⅰ增高明顯(p＜0.01)。產(chǎn)前，組Ⅱ較組Ⅰ增高不明顯(p＞0.05)。產(chǎn)后，組Ⅲ硫酸皮膚素含量較組Ⅱ和組Ⅰ輕度增加(p＞0.05)，均恢復(fù)接近正常。各組產(chǎn)后較產(chǎn)前硫酸皮膚素含量降低明顯(p＜0.01)。 討論MaureenA等發(fā)現(xiàn)正常晚孕孕婦及

11、胎兒體內(nèi)具有抗凝活性的DS濃度增高，分娩后恢復(fù)正常，故認(rèn)為其參與了血液呈高凝狀態(tài)的孕婦凝血酶的滅活。MichaelA等發(fā)現(xiàn)DS存在于正常晚孕孕婦的胎盤(pán)組織，為DS來(lái)自胎盤(pán)組織提供了有力的證據(jù)。 近年國(guó)內(nèi)外大量研究發(fā)現(xiàn)子癎前期患者的HC-Ⅱ抗凝活性較正常孕婦明顯降低，重度子癎前期患者更明顯。但作為HC-Ⅱ的特異性激活劑DS在子癎前期患者如何變化，尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。我們采取發(fā)色底物法測(cè)定子癎前期患者與正常孕婦產(chǎn)前、產(chǎn)后血漿DS抗凝活性