鵝魚(yú)皮膠原蛋白與硫酸皮膚素的同時(shí)提取及其結(jié)構(gòu)、活性研究.pdf

1、本文旨在建立從鵝魚(yú)皮中同時(shí)提取、分離得到膠原蛋白和硫酸皮膚素(Dermatan sulfate， DS)的方法，并對(duì)其結(jié)構(gòu)和活性進(jìn)行研究，為提取工藝的利用與膠原蛋白和DS的功能開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。主要研究?jī)?nèi)容如下:
　　1.建立了以鵝魚(yú)皮為原材料，從中同時(shí)提取分離得到膠原蛋白和DS的方法。通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)建立了最佳提取工藝，最佳工藝為:木瓜蛋白酶用量為4000IU/g，料液比為1∶20，pH為7，在50℃下提取8h。在此條件下膠原蛋白提

2、取率為59.4％，DS的提取量最高可達(dá)52.9mg/100g。
　　2.對(duì)所提取鵝魚(yú)皮膠原蛋白的理化性質(zhì)進(jìn)行研究。SDS-PAGE電泳分析表明膠原蛋白是由α1、α2、β三條肽鏈組成，為Ⅰ型膠原蛋白。氨基酸分析中，組氨酸含量最高，達(dá)22.53％，亞氨基酸含量占氨基酸總量的12.06％，不含色氨酸，該氨基酸組成符合Ⅰ型膠原蛋白的氨基酸組成結(jié)構(gòu)。在紫外光譜下，膠原蛋白的最大吸收峰為227nm;紅外分析顯示，膠原蛋白的三螺旋結(jié)構(gòu)保存完整。

3、最后對(duì)膠原蛋白的熱變溫度進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明熱變溫度為22.3℃。
　　3.在對(duì)鵝魚(yú)DS的結(jié)構(gòu)研究中，經(jīng)化學(xué)分析，DS氨基已糖含量為31.2％，葡萄糖醛酸含量為30.46％，水分含量和N含量分別為7.63％和2.35％。DS的凝膠電泳結(jié)果顯示其分子量在15-22kDa，證明所提取的DS純度較高，不含其他糖胺聚糖。在DS二糖分析中表明，DS具有4種不同種類(lèi)的二糖，且每種二糖所占總量的比例分別為△Di-0S(18.5％)、△Di-6S(

4、30.1％)、△Di-4S(44.9％)、△Di-diS(6.5％),從而得出鵝魚(yú)DS主要是由DS-4和DS-6混合組成。在寡糖片段分析中，得出部分寡糖片段的結(jié)構(gòu)為:dp2: IdoAS1-GalNAcS1;dp4: dIdoAS1-GalNAcS1-IdoAS1-GalNA;dp6: dIdoAS1-GalNAcS1-IdoAS1-GalNAcS1-IdoA-GalNAcS1;dp8: dIdoAS1-GalNAcS1-IdoAS1-

5、GalNAcS1-IdoA-GalNAcS1-IdoA-GalNAcS1;dp10: dIdoA-GalNAc-(IdoA-GalNAc)4。在最后進(jìn)行的核磁分析中進(jìn)一步確定了本研究所提取的糖胺聚糖為DS，同時(shí)證明鵝魚(yú)DS的種類(lèi)主要為DS-4和DS-6。
　　4.在鵝魚(yú)皮膠原蛋白的體外活性研究中，膠原蛋白表現(xiàn)出了良好的吸濕性和保濕性，可作為化妝品的原材料。此外，在對(duì)膠原蛋白溶解性和凝膠性的研究中表明其溶解度在pH為4.5時(shí)達(dá)到最大