HLA-DRB1,-DQB1基因多態(tài)性與家族性無癥狀性中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘病易感性的研究.pdf

1、目的：
　　中樞神經(jīng)系統(tǒng)（central nervous system,CNS）脫髓鞘病是一組以神經(jīng)髓鞘脫失為主，神經(jīng)元胞體及其軸索相對完好為特征的自身免疫性疾病，病因復(fù)雜，病種繁多，臨床表現(xiàn)多樣。在大多數(shù)神經(jīng)纖維表面都有一層起到保護(hù)作用的神經(jīng)纖維，幫助傳導(dǎo)神經(jīng)沖動，同時具備絕緣作用的結(jié)構(gòu)，稱為髓鞘。神經(jīng)髓鞘可因各種原因變性、壞死，從而引起相應(yīng)神經(jīng)功能的缺損，導(dǎo)致病患出現(xiàn)各種臨床病癥，稱之為脫髓鞘病。在CNS脫髓鞘病的研究中，以多

2、發(fā)性硬化(multiple sclerosis，MS)為最多。在 MS的遺傳學(xué)研究中，HLA基因與家族的相關(guān)性確定了MS發(fā)病具有遺傳傾向，這可能會在一定程度上解釋 MS患者家族中的發(fā)病率高的現(xiàn)象。目前雖已明確HLA基因是MS發(fā)生最重要的遺傳因素[1]，但因種族、地區(qū)等因素，所得結(jié)論并不完全一致，甚至有時結(jié)果截然相反。HLA基因與機(jī)體免疫應(yīng)答過程密切關(guān)聯(lián)，主要作用是呈遞抗原和限制免疫細(xì)胞之間的相互作用（即HLA限制性）。已有研究證實，HL

3、A-Ⅱ類基因相關(guān)性疾病，尤其是與 HLA-DRB1基因強(qiáng)關(guān)聯(lián)的疾病，可導(dǎo)致免疫調(diào)節(jié)等方面的障礙，表現(xiàn)出慢性病程、炎性、免疫功能障礙及一定的遺傳傾向[2]。迄今為止，國內(nèi)外關(guān)于中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘病易感基因的家族聚集性研究少見報道。為此，本研究采用 PCR-SSP方法研究河北承德地區(qū)2家系13例家族性無癥狀性中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘病患者HLA-DRB1，-DQB1等位基因的多態(tài)性與患病易感性的關(guān)系。
　　方法：
　　1、研究對象：<

4、br>　　1.1、病例組13例，為2007.9-2012.11河北省承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科收治的2個家系的家族性無癥狀性中樞神經(jīng)脫髓鞘病的患者。本研究在河北省承德地區(qū)所追蹤到2家系50人中共13人出現(xiàn)相似的患病癥狀及影像學(xué)表現(xiàn)，多為中年亞急性、慢性起病，無明顯前驅(qū)感染史，多數(shù)患者除偶發(fā)頭暈、頭痛，記憶力較前減退等輕度表現(xiàn)外無其他的明顯臨床癥狀，即臨床表現(xiàn)、體征不典型，影像學(xué)檢查（見附圖 Fig.3,4,5）中雙側(cè)側(cè)腦室周圍、雙側(cè)額顳

5、頂葉白質(zhì)內(nèi)可見多發(fā)點狀或斑片狀異常信號，呈脫髓鞘表現(xiàn)，綜合診斷為CNS脫髓鞘病。自2007年發(fā)現(xiàn)2家系病患以來，多數(shù)患者病情較發(fā)病時無明顯進(jìn)展。經(jīng)檢查排除腦血管病、腦白質(zhì)營養(yǎng)不良、經(jīng)典 MS（不符合2010年McDonald[3]的MS診斷標(biāo)準(zhǔn)）、影像學(xué)臨床孤立綜合征（RIS）等的可能性，無其他疾病家族遺傳史，故暫定義為家族性無癥狀性CNS脫髓鞘病。病例組中男性7例，女性6例，年齡37-56歲，平均49歲。
　　1.2、對照組33

6、例，近期均無感染史、無結(jié)核病史，研究開始前經(jīng)體檢均除外CNS疾病、家族遺傳性疾病及其他自身免疫性疾病。依照與病例組年齡、性別構(gòu)成相近的原則進(jìn)行系統(tǒng)隨機(jī)抽樣。兩組研究對象均為漢族人，經(jīng)分析，年齡、性別構(gòu)成差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。該研究通過倫理委員會同意，全部受試者知情并同意。
　　2、研究方法：
　　2.1、臨床資料的收集整理及分析：匯集整理2家族13例家族性無癥狀性中樞神經(jīng)脫髓鞘疾病患者的起病誘因、起病形式、首發(fā)癥

7、狀、受累部位等臨床表現(xiàn)，以及MRI等影像學(xué)資料。
　　2.2、樣本采集:所有受試者過夜禁食12～14小時于次日清晨肘部靜脈采血，EDTA抗凝，將血漿標(biāo)本離心后收集白細(xì)胞膜層凍存于-20℃冰箱內(nèi)。采用序列特異性引物-聚合酶鏈反應(yīng)法（PCR-SSP）對受試者血漿中HLA-DRB1、-DQB1等位基因型別進(jìn)行測定。
　　2.3、繪制系譜圖：通過追蹤調(diào)查、資料分析及基因檢測，繪制2家系的系譜圖，進(jìn)一步解釋此類疾病是否存在遺傳傾向，找

8、到可能的易感基因。
　　3、統(tǒng)計學(xué)分析：
　　應(yīng)用 SPSS17.0統(tǒng)計軟件對病例組與健康對照組的HLA-DRB1，-DQB1等位基因分布頻率（gene frequency）進(jìn)行四格表卡方檢驗，或連續(xù)校正檢驗（20％以上的理論值1＜T＜5，N＞40）分析，P<0.05具有顯著性。
　　結(jié)果：
　　1、 HLA-DRB1、-DQB1基因多態(tài)性的判斷
　　1.1、通過對2家系13例患者與33例健康對照進(jìn)行HLA

9、-DRB1，-DQB1基因SSP分型，共檢出12個型別的HLA-DRB1等位基因（分別是HLA-DRB1*01、*03、*04、*07、*08、*09、*10、*11、*12、*13、*14、*15等位基因）；5個型別 HLA-DQB1等位基因（分別是HLA-DQB1*02、*03、*04、*05、*06等位基因）。其中病例組包含6個型別的HLA-DRB1等位基因（分別是 HLA-DRB1*07、*08、*09、*11、*14、*15等

10、位基因）；4個型別 HLA-DQB1等位基因（分別是HLA-DQB1*02、*03、*05、*06等位基因）（見附表Table1 and2）。
　　1.2、每個家系中的樣本HLA-DRB1、-DRB1等位基因檢測結(jié)果均符合基因的分離、組合定律（見附圖Fig.1 and2）。每個樣本HLA-DRB1、-DRB1等位基因均符合HLA-DR與HLA-DQ的之間關(guān)聯(lián)關(guān)系（見附圖Fig.11）。
　　2、 HLA-DRB1、-DQB1

11、基因多態(tài)性與家族性無癥狀性中樞神經(jīng)脫髓鞘病的關(guān)系分析（見附表Table1 and2）
　　2.1、 HLA-DRB1*14在病例組與健康對照組中的基因頻率分別為38.46%和9.10%,差別有顯著意義(χ2=11.715，P=0.001<0.05)。
　　2.2、其他等位基因兩組間差別無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、脫髓鞘病多亞急性或慢性起病，無明顯誘因，是環(huán)境因素與遺傳因素共同作用的結(jié)果，M

12、RI檢查大腦白質(zhì)常有異常信號，有助于脫髓鞘病的早期診斷。
　　2、 HLA-DRB1*14基因可能是造成承德地區(qū)這兩個家系罹患脫髓鞘病的易感基因，在某些程度上可能賦予此類疾病一定的遺傳傾向，支持多數(shù)學(xué)者提出的遺傳因素和環(huán)境因素共同導(dǎo)致脫髓鞘疾病的觀點。但 HLA-DRB1*14基因是否是造成這兩個家系脫髓鞘病特殊臨床特點的關(guān)鍵基因還有待進(jìn)一步深入研究。
　　3、本研究未發(fā)現(xiàn)承德地區(qū)家族性無癥狀性中樞神經(jīng)脫髓鞘病與HLA-DR