Tregs對1-3-β-葡聚糖所致肺部炎癥中Th免疫應(yīng)答的調(diào)控機(jī)制.pdf

1、目的:
　　 有機(jī)粉塵(organicdust)主要是指空氣中漂浮的有機(jī)物顆粒,包括植物、動物和微生物源性的顆粒和微滴。在生產(chǎn)過程中接觸各類有機(jī)粉塵可引起以呼吸道和肺部炎癥為主要表現(xiàn)的一系列呼吸系統(tǒng)疾病,其中以農(nóng)民肺、甘蔗肺、蘑菇肺和鳥飼養(yǎng)工肺為代表的職業(yè)性變態(tài)反應(yīng)性肺泡炎(occupationalallergicalveolitis)等免疫性肺疾病危害較大。工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)加工環(huán)境中的有機(jī)粉塵不僅包括種類繁多的動植物本身所具有的復(fù)雜

2、成分,更常常夾雜一些包括真菌和細(xì)菌在內(nèi)的微生物源性的多重致病性物質(zhì),其中高濃度真菌污染較普遍。職業(yè)性變態(tài)反應(yīng)性肺泡炎是以免疫病理介導(dǎo)的一組疾病的統(tǒng)稱,也稱外源性變態(tài)反應(yīng)性肺泡炎(extrinsicallergicalveolitis,EAA)或過敏性肺炎(hypersensitivitypneumonitis,HP),以肺間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤和肉芽腫形成為其基本病理特征。病理改變表現(xiàn)為急性、亞急性及慢性形式,急性期表現(xiàn)為肺泡和間質(zhì)的炎性細(xì)胞

3、浸潤,肺泡腔中淋巴細(xì)胞聚集和巨噬細(xì)胞增多;亞急性期可出現(xiàn)肉芽腫;反復(fù)發(fā)作可發(fā)展為慢性期,出現(xiàn)不同程度的肺間質(zhì)纖維化。迄今,職業(yè)性變態(tài)反應(yīng)性肺泡炎的發(fā)病機(jī)制尚不十分清楚,特別是真菌在其所致變態(tài)反應(yīng)性肺泡炎中的作用地位亟待闡明。在工農(nóng)業(yè)產(chǎn)品的生產(chǎn)及加工過程中環(huán)境暴露的有機(jī)粉塵越來越復(fù)雜,嚴(yán)重危害勞動者的健康。研究有機(jī)粉塵對機(jī)體的危害,以及預(yù)防控制對策,是職業(yè)病防治工作的一個重要課題。
　　 1-3-β-葡聚糖(1-3-β-Gluca

4、n)是真菌細(xì)胞壁的主要結(jié)構(gòu)成份,為職業(yè)環(huán)境中真菌暴露的生物標(biāo)志物。動物實(shí)驗(yàn)證實(shí),1-3-β-葡聚糖暴露肺泡灌洗液(bronchoalveolarlavagefluid,BALF)中,早期炎性細(xì)胞顯著升高,淋巴細(xì)胞(CD3+CD4+T細(xì)胞)、中性粒細(xì)胞占優(yōu)勢,中晚期以巨噬細(xì)胞為主;病理觀察發(fā)現(xiàn),早期的肺間質(zhì)中性粒細(xì)胞浸潤,肺泡間隔增厚,肺泡腔淋巴細(xì)胞聚集。中晚期形成肉芽腫,肉芽腫中巨噬細(xì)胞聚集,外周主要是淋巴細(xì)胞。符合變態(tài)反應(yīng)性肺泡炎的病

5、理特征,被認(rèn)為是真菌所致變態(tài)反應(yīng)性肺泡炎的實(shí)驗(yàn)動物模型。動物實(shí)驗(yàn)研究表明,1-3-β-葡聚糖可改變免疫細(xì)胞類型及細(xì)胞因子產(chǎn)物。1-3-β-葡聚糖暴露,早期BALF中CD3+CD4+T細(xì)胞數(shù)量逐漸升高,中晚期肺門淋巴結(jié)(hilarnode,HLN)中CD3+CD4+T細(xì)胞占優(yōu)勢;早期BALF和肺門淋巴結(jié)中IL-12p70、IFN-γ及炎癥性細(xì)胞因子IL-6水平顯著升高,出現(xiàn)Th1型細(xì)胞免疫應(yīng)答;暴露中晚期Th2型細(xì)胞因子IL-10等表達(dá)顯

6、著升高,免疫應(yīng)答向Th2型偏移。此外,一類以表達(dá)IL-17為特征的新CD4+T細(xì)胞亞群Th17細(xì)胞近年來引起了廣泛的關(guān)注。Th17細(xì)胞在過敏性炎癥、肺纖維化、器官特異性自身免疫病、器官移植、及腫瘤等疾病的病理發(fā)展過程中發(fā)揮重要的作用,特別是在炎癥發(fā)展早期發(fā)揮的促炎性作用,提示炎癥性疾病中T細(xì)胞免疫應(yīng)答的建立不僅僅有Th1型和Th2型的參與,同時也可能存在Th17型細(xì)胞免疫應(yīng)答。以上研究提示在1-3-β-葡聚糖引起的變態(tài)反應(yīng)性肺部炎癥中,

7、可能存在以下免疫應(yīng)答機(jī)制:第一,Th免疫應(yīng)答參與1-3-β-葡聚糖引起的變態(tài)反應(yīng)性肺部炎癥的發(fā)生發(fā)展過程,其免疫應(yīng)答的效應(yīng)機(jī)制可能依賴于Th17-Th1-Th2的活化,即多種類型免疫應(yīng)答間的協(xié)調(diào)過渡及其相互平衡;第二,Th免疫應(yīng)答的發(fā)生時相和效應(yīng)強(qiáng)度可能影響1-3-β-葡聚糖引起的變態(tài)反應(yīng)性肺部炎癥的病理結(jié)局。Th1型免疫應(yīng)答的有效建立,Th1型與Th17型的相互平衡,以及隨后向Th2型免疫應(yīng)答的適時轉(zhuǎn)化對于變態(tài)反應(yīng)性肺部炎癥的進(jìn)程及結(jié)

8、局可能有著重要的影響。這一過程的啟動和平衡出現(xiàn)任何紊亂都可能影響疾病的嚴(yán)重程度和/或其進(jìn)一步的發(fā)生發(fā)展,因此需要一種免疫調(diào)控機(jī)制來調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫應(yīng)答。然而,目前關(guān)于1-3-β-葡聚糖所致的變態(tài)反應(yīng)性肺部炎癥Th連續(xù)活化及其相互平衡的調(diào)控機(jī)制尚未闡明。
　　 免疫調(diào)控是一個多細(xì)胞多因子參與的復(fù)雜過程。其中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(CD4+CD25+T細(xì)胞,regulatoryTcells,Tregs)發(fā)揮了重要的作用。Tregs可有效地維持免

9、疫系統(tǒng)的自穩(wěn)狀態(tài),其數(shù)量和/或功能的改變與CD3+CD4+T細(xì)胞數(shù)量/活性改變及Th免疫應(yīng)答轉(zhuǎn)變密切相關(guān)。Tregs特異地表達(dá)叉狀頭/翅膀狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子(forkheadboxP3,Foxp3)和表面分子CD25、細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)蛋白4(cytotoxicT-lymphocyte-associatedprotein4,CTLA-4)和糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)腫瘤壞死因子受體(Glucocorticoid-inducedTNFRfamily-

10、relatedreceptor,GITR)。其中,Foxp3對Tregs的發(fā)育具有關(guān)鍵作用;CD25、CTLA4和GITR分子參與Tregs功能的發(fā)揮。試驗(yàn)表明,Tregs廣泛的免疫抑制性主要體現(xiàn)在抑制體內(nèi)CD3+CD4+T細(xì)胞等多種免疫細(xì)胞的活化和增殖。Tregs通過其功能相關(guān)分子CTLA-4和GITR與其它細(xì)胞直接接觸,也可分泌抑制性細(xì)胞因子IL-10和TGF-β等,或與天然免疫系統(tǒng)最重要的抗原遞呈細(xì)胞樹突狀細(xì)胞(dendritic

11、cell,DC)相互作用,抑制針對自身抗原反應(yīng)效應(yīng)細(xì)胞的增殖。目前,對Tregs的認(rèn)識主要集中于自身免疫性疾病、移植和腫瘤免疫等方面。Th應(yīng)答效應(yīng)的差異性明顯受控于機(jī)體免疫網(wǎng)絡(luò)的調(diào)節(jié)機(jī)制,即包括細(xì)胞因子的交叉修飾和免疫細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡。而具有接觸或分泌抑制作用的Tregs可能正是在變態(tài)反應(yīng)性肺部炎癥生發(fā)展過程中處于舉足輕重的作用地位。我們有理由推測,Tregs可能正是通過調(diào)控Th應(yīng)答及各種Th應(yīng)答之間的相互平衡和轉(zhuǎn)化,進(jìn)而決定變態(tài)反應(yīng)性肺

12、部炎癥的進(jìn)程與結(jié)局。但其確切的效應(yīng)機(jī)制尚不清楚,仍需進(jìn)一步研究。
　　 Tregs對Th應(yīng)答的時效特征如何?Tregs是否通過調(diào)控Th應(yīng)答和Th極化從而影響變態(tài)反應(yīng)性肺部炎癥的病理進(jìn)程?Tregs對Th應(yīng)答作用靶位及其相關(guān)機(jī)制如何?Tregs是否通過改變DC表型或抑制DC功能影響Th應(yīng)答啟動?是否通過調(diào)控CD4+T細(xì)胞的活化或效應(yīng)T細(xì)胞的活性調(diào)控免疫應(yīng)答?
　　 為回答上述問題,我們擬利用小鼠1-3-β-葡聚糖暴露模型,

13、特別是采用Tregs體內(nèi)阻斷實(shí)驗(yàn)直接觀察Tregs在1-3-β-葡聚糖所致肺部炎癥過程中的作用地位,通過對比分析不同模型免疫應(yīng)答的變化特點(diǎn),以期確立Tregs在Th應(yīng)答建立和Th極化調(diào)控過程中相關(guān)的效應(yīng)機(jī)制,旨在為職業(yè)性變態(tài)反應(yīng)性肺部炎癥的預(yù)防和有效控制提供新的理論依據(jù)。
　　 實(shí)驗(yàn)方法:
　　 一、應(yīng)用抗CD25單克隆抗體消除小鼠體內(nèi)的Tregs
　　 C57BL/6小鼠(6-8周,雌性)按體重隨機(jī)分為三組:葡

14、聚糖抗體組,葡聚糖模型組,對照組。葡聚糖抗體組小鼠經(jīng)腹腔注射100μganti-CD25mAb,消除小鼠體內(nèi)Tregs,建立小鼠Tregs消除模型。葡聚糖模型組、對照組C57BL/6小鼠腹腔注射等體積的IgG1同型對照抗體。葡聚糖抗體組、葡聚糖模型組和對照組C57BL/6小鼠分別行非暴露式氣管內(nèi)灌注法灌注酵母多糖(zymosanA)或生理鹽水。將各組C57BL/6小鼠分別于灌注后1,7,14,28天處死,收集BALF;摘取肺門淋巴結(jié)、脾

15、組織,分別制備單細(xì)胞懸液。摘取肺臟,部分保存于-80℃;部分甲醛固定,用于病理實(shí)驗(yàn)。
　　 二、炎性細(xì)胞分類計(jì)數(shù)
　　 將各組動物各個時間點(diǎn)收集的BALF500rpm,40C,離心10min,收集細(xì)胞,制備單細(xì)胞懸液,取10μl細(xì)胞懸液置于細(xì)胞計(jì)數(shù)板上,進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。細(xì)胞數(shù)=(四個大格的細(xì)胞總數(shù)/4)×104。取400μl細(xì)胞懸液,室溫1500rpm離心8min,棄上清,加入200μl小牛血清混勻,推片,室溫晾干,用甲醇

16、固定,37℃溫箱過夜,用Giemsa染液染色,室溫15min;蒸餾水背沖,晾干。油鏡下計(jì)數(shù)200個細(xì)胞中巨噬細(xì)胞,中性粒細(xì)胞,淋巴細(xì)胞的數(shù)量。
　　 三、病理切片染色
　　 肺組織常規(guī)石蠟切片(5μm),進(jìn)行H&E染色,石蠟切片放入烘箱內(nèi)烘烤2小時;然后將肺組織切片置于二甲苯中浸泡10min,更換二甲苯后再浸泡10min;梯度濃度酒精浸泡各1min,脫去二甲苯;流水沖洗5min;蘇木精染色液浸染10min,自來水沖洗,返

17、藍(lán);2%鹽酸酒精20s至1min;自來水沖洗12到24h;0.5%伊紅染液浸染1至2min,流水沖洗;梯度濃度酒精脫水;二甲苯透明,中性樹膠封片。觀察小鼠肺組織肺間質(zhì)炎性細(xì)胞侵潤及肉芽腫的形成改變。
　　 四、流式細(xì)胞技術(shù)
　　 取BALF細(xì)胞1×106個,應(yīng)用anti-CD3-Percp,anti-CD4-PE-CY7,anti-CD25-APC熒光抗體,4℃條件下避光孵育30min,3%FBS的PBS清洗細(xì)胞兩次,破

18、膜液孵育細(xì)胞30min,再次清洗細(xì)胞兩次,應(yīng)用anti-FOXP3-FITC熒光抗體孵育細(xì)胞1h,進(jìn)行胞內(nèi)染色。清洗后,加入1%多聚甲醛的PBS300μl,混勻,FACSCantoⅡ流式細(xì)胞儀檢測,Diva軟件進(jìn)行分析。
　　 取脾、肺門淋巴結(jié)細(xì)胞各1×106個,應(yīng)用anti-CD3-Percp,anti-CD4-PE-CY7,anti-CD25-APC,anti-CTLA4-PE熒光抗體,4℃條件下避光孵育30min,3%FB

19、S的PBS清洗細(xì)胞兩次,破膜液孵育細(xì)胞30min,再次清洗細(xì)胞兩次,應(yīng)用anti-FOXP3-FITC熒光抗體孵育細(xì)胞1h,進(jìn)行胞內(nèi)染色。清洗后,加入1%多聚甲醛的PBS300μl,混勻,FACSCantoⅡ流式細(xì)胞儀檢測,Diva軟件進(jìn)行分析。
　　 取脾、肺門淋巴結(jié)細(xì)胞各1×106個,應(yīng)用anti-CD11c-APC,anti-CD80-FITC,anti-MHCⅡ-PE熒光抗體,4℃條件下避光孵育30min,3%FBS的P

20、BS清洗細(xì)胞兩次,加入1%多聚甲醛的PBS300μl,混勻,FACSCantoⅡ流式細(xì)胞儀檢測,Diva軟件進(jìn)行分析。
　　 五、實(shí)時熒光定量PCR(RealtimePCR)
　　 取100mg肺組織,加入1mlTrizol試劑,冰浴勻漿,12000rpm離心10min,將上清轉(zhuǎn)移至新管中,室溫靜置5min;每管加入200μl氯仿,用力震蕩30秒,室溫靜置3min;4℃,12000rpm,離心15min;吸取上清至新的1

21、.5mlEP管。加入等體積-20℃預(yù)冷的異丙醇0.5ml,混勻后室溫沉淀10min;4℃,12000rpm離心10min后,棄上清;加入4℃預(yù)冷的75%乙醇1ml,洗滌沉淀及離心管壁;4℃,7500rpm離心5min,棄上清;室溫干燥15分鐘;加入30μlRnase-free水,至完全溶解,測定RNA濃度。應(yīng)用Takara公司逆轉(zhuǎn)錄酶,將2μgRNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,用ABI7500RealtimePCR儀定量測定,相對定量法計(jì)算基因的

22、表達(dá)水平。
　　 六、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)
　　 應(yīng)用eBioscience公司的試劑盒檢測,用100μl包被抗體孵育96孔板,4℃過夜,洗板,200μl檢測稀釋液室溫阻斷1h,沈板,加入100μl不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品或BALF室溫孵育2h,洗板,加入檢測抗體100μl室溫1h,洗板,加入辣根過氧化物酶100μl室溫30min,加入底物室溫孵育15min,加入終止液,450nm處讀板,檢測細(xì)胞因子的分泌水平。

23、　　 七、免疫熒光檢測
　　 肺組織切片用0.1MPBS清洗兩次,用羊血清(Histostain-PlusKits,ZSBG-BIO)孵育30min以降低非特異性結(jié)合。用anti-CD4-PE-CY7染料(BDPharmingen,SanJose,CA,USA)4℃孵育切片過夜。PBS洗三次,用anti-IL17A-AF488染料(eBioscience,SanDiego,CA92121,USA)室溫孵育2h,共聚焦激光掃描顯

24、微鏡(TCSsp2/AOBS,LEICA)觀察切片,拍攝圖片,Leica共聚焦軟件分析切片中表達(dá)CD4+IL-17A+細(xì)胞。
　　 八、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　 數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析,統(tǒng)計(jì)結(jié)果表示為mean士S.E.M,采用單因素方差分析比較各組間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;當(dāng)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義時,用SNK法進(jìn)行組間比較,p＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　 一、抗CD25單克隆抗體腹腔注射

25、有效消除小鼠體內(nèi)CD4+CD25+Tregs
　　 葡聚糖抗體組小鼠腹腔注射抗CD25單克隆抗體,葡聚糖模型組及對照組小鼠腹腔注射抗IgG1同型對照抗體。非暴露式氣管內(nèi)灌注1-3-β-葡聚糖及生理鹽水。經(jīng)流式細(xì)胞技術(shù)檢測,灌注后1、7、14、28天葡聚糖抗體組小鼠脾細(xì)胞中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞占CD4+細(xì)胞比例較葡聚糖模型組、對照組小鼠顯著降低,差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。腹腔注射CD25抗體有效的消除了小鼠體內(nèi)CD4+CD25

26、+Tregs。
　　 二、Tregs抑制1-3-β-葡聚糖所致肺部炎癥中炎性細(xì)胞的聚集
　　 葡聚糖灌注誘導(dǎo)C57BL/6小鼠肺部產(chǎn)生明顯炎癥,主要表現(xiàn)為早期多種炎性細(xì)胞的聚集,包括中性粒細(xì)胞,巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞。灌注1-3-β-葡聚糖后1、7、14、28天,葡聚糖抗體組小鼠BALF中細(xì)胞總數(shù)持續(xù)高于葡聚糖模型組及對照組小鼠;灌注1-3-β-葡聚糖后早期,葡聚糖抗體組中性粒細(xì)胞數(shù)及淋巴細(xì)胞數(shù)明顯高于葡聚糖模型組和對照組;

27、灌注1-3-β-葡聚糖后中晚期,葡聚糖抗體組巨噬細(xì)胞明顯高于葡聚糖模型組和對照組。表明Tregs的消除誘導(dǎo)葡聚糖暴露早期中心粒細(xì)胞的聚集,葡聚糖暴露中晚期巨噬細(xì)胞的聚集。
　　 三、Tregs抑制1-3-β-葡聚糖所致肺部炎癥的發(fā)展
　　 葡聚糖模型組小鼠在灌注后,早期肺間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤明顯,肺間隔增厚;隨后肺間質(zhì)中的炎性細(xì)胞逐漸減少,肺間隔逐漸恢復(fù),可觀察到細(xì)胞性結(jié)節(jié)。葡聚糖抗體組小鼠在灌注后,早期肺間質(zhì)細(xì)胞大量浸潤,

28、其浸潤程度明顯高于葡聚糖模型組,肺間隔增厚明顯且有較大的細(xì)胞團(tuán)塊形成;中期仍有大量炎性細(xì)胞浸潤于肺間質(zhì)中,肺間隔持續(xù)增厚;晚期炎性細(xì)胞減少,肺間隔有所恢復(fù),偶可見巨噬細(xì)胞聚集成小型細(xì)胞性結(jié)節(jié)。表明Tregs的消除導(dǎo)致肺組織炎性細(xì)胞的浸潤程度增強(qiáng)。
　　 四、1-3-β-葡聚糖誘導(dǎo)小鼠體內(nèi)Tregs的增加
　　 葡聚糖灌注后1、7、14、28天,葡聚糖模型組小鼠BALF、肺門淋巴結(jié)、脾中Tregs/CD4+比例較對照組明顯

29、升高,BALF、肺門淋巴結(jié)中Tregs/CD4+的比例在灌注早期顯著增加,隨時間逐漸降低,但仍高于對照組,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。脾中Tregs/CD針比例在灌注早期明顯高于對照組,但中晚期逐漸恢復(fù)至對照組水平。葡聚糖抗體組小鼠各組織中TregS/CD4+比例顯著低于葡聚糖模型組。
　　 五、Tregs調(diào)控1-3-β-葡聚糖所致肺部炎癥Th免疫應(yīng)答
　　 灌注葡聚糖后1天,葡聚糖模型組小鼠BALF中IFN-γ的分泌水平較對照組明

30、顯增加,而后逐漸降低至對照組水平。葡聚糖抗體組小鼠BALF中IFN-γ的分泌水平卻持續(xù)較對照組顯著增加。葡聚糖模型組小鼠BALF中IL-4的分泌表達(dá)在灌注后中晚期逐漸增加,而葡聚糖抗體組IL-4的分泌水平始終保持與對照組相似,低于葡聚糖模型組。
　　 葡聚糖灌注后7天,葡聚糖模型組小鼠肺組織中有大量CD4+CD17A+細(xì)胞聚集在增厚的肺間隔。葡聚糖抗體組小鼠CD4+CD17A+細(xì)胞明顯少于葡聚糖模型組,與對照組基本相似。

31、　　 葡聚糖模型組小鼠肺組織中IL-2的表達(dá)水平在灌注后1、7、28天均高于對照組,葡聚糖抗體組IL-2的表達(dá)水平在各個時間點(diǎn)均高于對照組和葡聚糖模型組。葡聚糖模型組小鼠肺組織IL-4的表達(dá)水平在灌注后中晚期較對照組顯著增加,而葡聚糖抗體組IL-4的表達(dá)水平始終低于葡聚糖模型組。葡聚糖模型組小鼠肺組織IL-17的表達(dá)在灌注后各個時間點(diǎn)均高于對照組,葡聚糖抗體組IL-17的表達(dá)始終較葡聚糖模型組降低。
　　 表明Tregs可以抑

32、制Th1型免疫應(yīng)答的建立,從而調(diào)控Th1/Th2型和Th1/Th17型免疫應(yīng)答間的相互平衡。
　　 六、Tregs直接通過表面分子CTLA-4調(diào)控1-3-β-葡聚糖所致肺部炎癥Th免疫應(yīng)答
　　 葡聚糖模型組小鼠灌注葡聚糖后早期,肺門淋巴結(jié)和脾中表面表達(dá)CTLA4的Tregs較對照組明顯增加,而后逐漸降低。葡聚糖抗體組淋巴結(jié)和脾中表達(dá)CTLA4的Tregs顯著低于葡聚糖模型組。顯示Tregs的免疫抑制功能依賴其表面活性因

33、子CTLA4。
　　 七、Tregs通過抑制DC活性影響1-3-β-葡聚糖所致肺部炎癥Th免疫應(yīng)答
　　 葡聚糖灌注后早期,葡聚糖模型組肺門淋巴結(jié)中表面表達(dá)CD80和MHCⅡ的DC較對照組明顯增加,隨后降低。而葡聚糖抗體組表達(dá)CD80和MHCⅡ的DC低于葡聚糖模型組。表明Tregs可能通過抑制DC的活性發(fā)揮其免疫抑制功能。
　　 八、Tregs間接通過抑制性細(xì)胞因子IL-10調(diào)控1-3-β-葡聚糖所致肺部炎癥Th

34、免疫應(yīng)答
　　 灌注葡聚糖后,葡聚糖模型組小鼠肺組織中IL-10的表達(dá)較對照組明顯增加,直至灌注后14天;葡聚糖抗體組小鼠肺組織中IL-10的表達(dá)顯著低于葡聚糖模型組。葡聚糖模型組和葡聚糖抗體組小鼠肺組織中TGF-β的表達(dá)均明顯高于對照組,但兩組之間差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明Tregs免疫抑制功能的發(fā)揮依賴抑制性細(xì)胞因子IL-10。
　　 結(jié)論:
　　 1、Tregs抑制1-3-β-葡聚糖所致的肺部炎癥發(fā)生發(fā)展的過