肺部介入凝膠應用及局部免疫應答的研究.pdf

1、目的：利用長耳兔模型觀察已選定的三種單純凝膠介質的可溶性、滲透性以及吸收和安全情況，對其可否在臨床中經(jīng)支氣管鏡局部應用做出初步評估。觀察含M-母牛分枝桿菌疫苗免疫蛋白凝膠的吸收和安全情況并對注射適宜劑量和不良反應進行分析，著重對含M-母牛分枝桿菌疫苗免疫蛋白凝膠在局部及全身產(chǎn)生的免疫應答效果進行探討，從而為今后開發(fā)可應用于臨床的結核病的局部免疫治療提供依據(jù)。 方法：將45只日本長耳兔按照隨機分組法進行分組，首先分為兩大組，凝膠實

2、驗組20只，免疫刺激組25只。將凝膠實驗組按照隨機分組法分為4組，每組5只日本長耳兔。進行下列處置： (1)對照組，不進行任何處理； (2)單純a-凝膠組，經(jīng)支氣管鏡于日本長耳兔左肺注入單純a-凝膠2.5ml； (3)單純g-凝膠組，經(jīng)支氣管鏡于日本長耳兔左肺注入單純g-凝膠2.5ml； (4)單純k-凝膠組，經(jīng)支氣管鏡于日本長耳兔左肺注入單純k-凝膠2.5ml。 以上各組每日記錄體溫變化，觀察

3、飲食、活動性、對外界刺激的反應、糞便顏色等一般情況，測量注入凝膠前及處死前體重，檢測注入凝膠前及處死前血常規(guī)、T細胞亞群，注入凝膠一周后處死解剖，同時觀察日本長耳兔內(nèi)臟特別是肺臟情況，選取凝膠注入部位肺組織進行病理檢查。將免疫刺激組按照隨機分組法分為5組，每組5只日本長耳兔。進行下列處置： (1)第1組，即對照組，經(jīng)支氣管鏡于日本長耳兔左肺注入生理鹽水3ml，每周一次，共四周； (2)第2組，經(jīng)支氣管鏡于日本長耳兔左肺注

4、入k-凝膠(2.5ml)與以少量注射用水(0.5ml)溶解的M-母牛分枝桿菌疫苗免疫蛋白粉劑(5.63 μg)的混合液3ml，每周一次，共四周； (3)第3組，經(jīng)支氣管鏡于日本長耳兔左肺注入k-凝膠(2.5ml)與以少量注射用水(0.5ml)溶解的M-母牛分枝桿菌疫苗免疫蛋白粉劑(11.25μg)的混合液3ml，每周一次，共四周； (4)第4組，經(jīng)支氣管鏡于日本長耳兔左肺注入k-凝膠(2.5ml)與以少量注射用水(0.5

5、ml)溶解的M-母牛分枝桿菌疫苗免疫蛋白粉劑(22.50 μg)的混合液3ml，每周一次，共四周； (5)第5組，經(jīng)支氣管鏡于日本長耳兔左肺注入k-凝膠(2.5ml)與以少量注射用水(0.5ml)溶解的M-母牛分枝桿菌疫苗免疫蛋白粉劑(28.13 μg)的混合液3ml，每周一次，共四周。 其中，第2組、第3組、第4組、第5組屬于免疫攻擊組。以上各組每日記錄體溫變化，觀察飲食、活動性、對外界刺激的反應、糞便顏色等一般情況，

6、每周測量體重；在每次注入24小時后檢測血常規(guī)；檢測刺激前及刺激后外周血T細胞亞群、外周血中γ-干擾素含量；四周后處死解剖，觀察日本長耳兔內(nèi)臟特別是肺臟情況，以生理鹽水灌洗肺泡，收集灌洗液后送免疫實驗室檢測γ-干擾素，并將部分肺組織研磨，收集研磨后混漿送免疫實驗室檢測γ-干擾素，選取注入部位肺組織進行病理檢查。 結果： 1.凝膠實驗組：單純a-凝膠組、單純g-凝膠組及單純k-凝膠組與對照組體溫、體重、血常規(guī)，外周血T細胞亞

7、群相比差異無統(tǒng)計學意義。單純a-凝膠組、單純g-凝膠組及單純k-凝膠組各組內(nèi)凝膠注入前與處死解剖前CD3、CD4、CD8百分比相比差異亦無統(tǒng)計學意義。單純a-凝膠組、單純g-凝膠組及單純k-凝膠組與對照組光鏡病理觀察相比細支氣管未發(fā)生明顯變化，肺泡結構完整，間隔未見增厚及炎細胞浸潤。 2.免疫刺激組：第2、3、4、5組與第1組體溫、體重以及血液中紅細胞數(shù)、白細胞數(shù)、血紅蛋白量等血常規(guī)指標相比差異無統(tǒng)計學意義；第4、5組與第1組外

8、周血CD3、CD4百分比相比差異有統(tǒng)計學意義，第4、5組外周血CD3、CD4百分比較第1組增高；第3、4、5組與第1組外周血CD8百分比相比差異有統(tǒng)計學意義，第3、4、5組外周血CD8百分比較第1組降低。第4、5組刺激后肺組織研磨混漿中的γ-干擾素含量升高。光鏡病理學檢查第4、5組與第1組相比細支氣管未發(fā)生明顯變化，肺泡結構基本保持完整，間隔輕度增寬，間隔內(nèi)可見淋巴細胞浸潤。 結論： 1.a-凝膠、g-凝膠和k-凝膠都具