人胚胎干細胞建系，鑒定及分化為多能性間充質(zhì)樣前體細胞.pdf

1、人胚胎干細胞(hESC)是一類來源于植入前囊胚內(nèi)細胞團(ICM)，具有體外無限增殖潛能且能在特定條件下分化為多類成體組織或胚外組織的細胞群體。它作為體外研究人類胚胎發(fā)育的優(yōu)勢模型，進行藥物篩選的良好平臺，參與細胞治療的無限資源，越來越受到全世界科研工作者的關(guān)注。
　　 目前，建立能廣泛適用于臨床的hES細胞系成為世界關(guān)注的焦點.然而大部分已經(jīng)建立的hES細胞系，包括NIH認可的在內(nèi)，均在建系之初以及后續(xù)的培養(yǎng)過程中直接或間接地接

2、觸到非人源化物質(zhì)，這將限制其未來的臨床應用前景。雖然人源飼養(yǎng)層培養(yǎng)體系，hESC自體來源的飼養(yǎng)層培養(yǎng)體系，以及多種無飼養(yǎng)層培養(yǎng)體系或許能安全有效地培養(yǎng)hESC，但是完全不接觸任何異源物質(zhì)的ICM分離過程也亟待建立。我們采用非接觸性激光輔助孵出系統(tǒng)結(jié)合連續(xù)的培養(yǎng)來獲得孵出囊胚，并以此為材料，不通過“免疫手術(shù)”等可能接觸異源物質(zhì)的操作，建立起一株屬于中國族群的hES細胞系ZJUhES-1.該細胞系符合hESC的相關(guān)標準：具備典型的形態(tài)學特征

3、；表達一系列hESC特異性標志；能長期增殖并維持穩(wěn)定的二倍體核型；能在體內(nèi)體外分化為多個胚層的細胞。同時，DNA指紋圖譜鑒定證實ZJUhES-1具有特有的身份，不同于其它已報道細胞系，
　　 成功建立干細胞治療需要具備多向分化潛能且免疫相容的干細胞群體，高效的定向分化技術(shù)，以及能安全有效地擴增干細胞群體的培養(yǎng)體系。除了所熟知的一些成體組織外，hESC逐漸成為又一類能分離獲得間充質(zhì)樣細胞的組織來源。然而hESC單細胞消化后難以存活

4、的特征，限制其目前的分化研究和未來的臨床應用.因此我們采用ROCK抑制劑Y-27632提高hESC單細胞消化貼壁后的存活率，并以此單層系統(tǒng)為基礎(chǔ)，利用無血清無血清替代物且成分明確的N2827培養(yǎng)體系，將hESC分化為間充質(zhì)樣前體細胞(hESC-MP)，整個過程不接觸任何動物源性物質(zhì)。分化所得的細胞呈現(xiàn)成纖維樣細胞形態(tài)，符合MSC的評價標準，如自我更新潛能，表達多種MSC特異性標志，能分化為成骨細胞，脂肪細胞和軟骨細胞等間質(zhì)細胞.與其他文

5、獻報道的hESC-MSC相比，我們所獲得hESC-MP還能分化為平滑肌細胞，心肌細胞，功能性肝細胞和表達不同神經(jīng)遞質(zhì)的神經(jīng)細胞，這使得它們更適合于未來的臨床應用。
　　 此外，我們還通過Y-27632協(xié)助的單層誘導系統(tǒng)在含血清的培養(yǎng)條件下將hESC分化為另一類MSC.與N2827培養(yǎng)體系中獲得的hESC-MP相比，這類hESC-MSC表達更高比例的MSC特異性分子標志，并呈現(xiàn)更強的增殖潛能，我們將其移植入四氯化碳(CCI4)誘導