腫瘤發(fā)生的腎虛端粒機(jī)制研究.pdf

1、湖北中醫(yī)藥大學(xué)博士學(xué)位論文腫瘤發(fā)生的腎虛端粒機(jī)制研究姓名：呂苑忠申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：中醫(yī)內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師：孔慶志201005072建立具有科學(xué)屬性的中醫(yī)抗腫瘤理論，科學(xué)有效地指導(dǎo)抗腫瘤的臨床實(shí)踐和實(shí)驗(yàn)研究。3從細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)水平豐富和發(fā)展中醫(yī)理論。方法與結(jié)果1通過觀察右歸飲含藥血清對A549人肺腺癌細(xì)胞形態(tài)與功能、端粒動力學(xué)、端粒酶、端錨酶、P53基因的影響探討腫瘤發(fā)生的腎虛端粒機(jī)制。2運(yùn)用倒置顯微鏡觀察A549人肺腺癌細(xì)胞形

2、態(tài)、傳代的變化，采用【3H】TdR攝取試驗(yàn)和XGal轉(zhuǎn)染試驗(yàn)檢測衰老細(xì)胞，結(jié)果顯示：經(jīng)不同濃度右歸飲含藥血清處理后各組細(xì)胞對[3H]TdR的攝取率逐漸降低，經(jīng)7次傳代后，30A右歸飲含藥血清組的攝取率降至：(678092)％，10％、20％右!)3飲含藥血清組分別降為：(3749268)％、(3433259)％，而對照組的攝取率為：(8484486)％，各組比較，差異顯著(P001)；各組細(xì)胞轉(zhuǎn)染XGal的效率逐漸提高，經(jīng)7次傳代后，3

3、0％右歸飲含藥血清組XGal的轉(zhuǎn)染率達(dá)到：(8704447)％，10％、2O％右歸飲含藥血清組分別為：(3455275)％、(3785196)％，而對照組為：(620089)％，各組比較，差異顯著(P001)；各組細(xì)胞每次傳代時(shí)間逐漸延長，傳代次數(shù)逐漸減少，衰老細(xì)胞逐漸顯現(xiàn)，30％右歸飲含藥血清組在第700063代，10％、20％組分別在第1700IO63代和1550084代，細(xì)胞傳代終止并在顯微鏡下見衰老凋亡細(xì)胞。3采用定量熒光原位雜

4、交法(QFISH)上流式細(xì)胞儀檢測每一代細(xì)胞端粒長度，結(jié)果顯示：經(jīng)不同濃度右歸飲含藥血清處理后各組細(xì)胞端粒長度逐漸縮短，細(xì)胞傳代丟失的端粒長度逐漸增加，30％右歸飲含藥血清組平均每次傳代丟失的端粒長度達(dá)129012kb，10％、2o％組分別為05301lkb和057003kb。4運(yùn)用多聚合酶鏈一酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)(PCRELISA)檢測細(xì)胞端粒酶活性，結(jié)果顯示：經(jīng)不同濃度右歸飲含藥血清處理后各組端粒酶活性逐漸降低，在第7代培養(yǎng)細(xì)胞中，30