Notch1信號蛋白在卵巢腫瘤發(fā)生中的作用及其機制的初步研究.pdf

1、研究背景：
　　卵巢癌是發(fā)生于卵巢組織的惡性腫瘤，占所有婦科惡性腫瘤的15％左右，僅次于宮頸癌，而其死亡率卻位居第一。卵巢癌有起病隱匿，早期不易發(fā)現(xiàn)，易轉(zhuǎn)移，愈后差等特點。因此探討卵巢癌的發(fā)生機制、尋找新的研究靶點、為腫瘤基因治療提供新思路無疑具有十分重要的意義。
　　從果蠅到人類，Notch途徑的遺傳特征高度保守；而在哺乳動物中，其過程尤為復(fù)雜。Notch信號蛋白配體與補體互相作用導(dǎo)致Notch蛋白連續(xù)裂解，釋放出胞內(nèi)段（

2、ICN），ICN轉(zhuǎn)入細(xì)胞核內(nèi)，通過與CBF1/Su(H)/LAG1(CSL)相互作用形成復(fù)合物，使后者由轉(zhuǎn)錄抑制因子轉(zhuǎn)化為轉(zhuǎn)錄激活因子。ICN-CBF1/Su(H)/LAG1(CSL)復(fù)合物直接誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄的靶基因是HES1，HES1是堿性螺旋-環(huán)-螺旋(basic helix-loop-helix，bHLH)類轉(zhuǎn)錄因子，它又調(diào)節(jié)其它與細(xì)胞分化直接相關(guān)的基因的轉(zhuǎn)錄。該信號途徑參與細(xì)胞的分化、增值和凋亡，并影響許多器官的發(fā)育和功能。
　

3、　既往的研究表明，Notch途徑的病理生理改變與多種腫瘤的發(fā)生相關(guān)，Notch受體和配體在正常卵巢組織中有表達(dá)，在卵巢病變時，其表達(dá)也發(fā)生變化。因此，Notch信號蛋白在卵巢組織的發(fā)生及其腫瘤的形成過程中發(fā)揮著重要作用。Notch信號蛋白與卵巢癌的關(guān)系是一個新的研究領(lǐng)域，也為卵巢癌的基因治療提供了新的靶點。
　　目的：
　?。?）探討Notch1在卵巢腫瘤形成和轉(zhuǎn)化中的表達(dá)特點及其與卵巢癌的臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系。
　　

4、（2）檢測卵巢癌細(xì)胞系SKOV3、HO-8910、HO-8910-PM和3AO中Notch1信號蛋白的表達(dá)，篩選Notch1信號蛋白高表達(dá)的細(xì)胞系，為進(jìn)一步實驗研究提供實驗依據(jù)。
　?。?）檢測卵巢癌細(xì)胞系中Notch1信號蛋白下游基因HES1的表達(dá)，為進(jìn)一步實驗研究提供實驗依據(jù)。
　　方法：
　?。?）采用免疫組織化學(xué)SP染色法檢測34例卵巢癌、18例卵巢交界性瘤、23例卵巢良性腫瘤和26例正常卵巢組織中Notch1

5、的表達(dá)，采用SPSS12.0軟件的卡方檢驗統(tǒng)計方法進(jìn)行分析。
　　（2）采用免疫熒光染色法、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）法及Westernblotting對卵巢癌細(xì)胞系SKOV3、HO-8910、HO-8910-PM和3AO中Notch1表達(dá)進(jìn)行檢測。
　?。?）采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）法及Westernblotting對卵巢癌細(xì)胞系SKOV3、HO-8910、HO-8910-PM和3AO中Notch1信

6、號蛋白下游HES1基因表達(dá)進(jìn)行檢測。
　　結(jié)果：
　?。?）Notch1在正常卵巢組織、卵巢良性腫瘤、卵巢交界性瘤、卵巢癌中均有表達(dá)。從正常卵巢組織、卵巢良性腫瘤、卵巢交界性瘤到卵巢癌，Notch1的表達(dá)率呈遞增趨勢，分別為23％（6/26）、30％（7/23）、67％（12/18）和74％（25/34），Notch1在卵巢癌中的表達(dá)與其在卵巢交界性瘤、卵巢良性腫瘤和正常卵巢組織中的表達(dá)差異有顯著性（P〈0.01），而后三者

7、比較差異無顯著性（P〉0.05）。
　　（2）Notch1在卵巢癌中的表達(dá)與手術(shù)病理分期、周圍組織浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理類型差異無顯著性（P>0.05），與卵巢癌病理分化程度有關(guān)（P〈0.01），分化程度越低，Notch1的表達(dá)越低。
　?。?）免疫熒光染色、RT-PCR電泳及Westernblotting結(jié)果顯示Notch1信號蛋白在4種卵巢癌細(xì)胞系中均有表達(dá)，其在HO-8910-PM中為高表達(dá)，在SKOV3和3AO中為中

8、等表達(dá)，在HO-8910中為低表達(dá)。
　?。?）RT-PCR電泳結(jié)果及Westernblotting結(jié)果顯示Notch1信號蛋白下游HES1基因在4種卵巢癌細(xì)胞系中均有表達(dá)，且各細(xì)胞系中的表達(dá)無顯著差異。
　　結(jié)論：
　　（1）Notch1在卵巢組織的癌變轉(zhuǎn)化過程中表達(dá)逐漸增加，可能與早期卵巢癌癌變的啟動有關(guān)。
　?。?）Notch1在卵巢癌組織中的表達(dá)與其病理分化程度有關(guān)，分化程度越低，Notch1的表達(dá)越低，

9、可能與其惡性程度有關(guān)。
　?。?）多種卵巢癌細(xì)胞系中均有Notch1信號蛋白的表達(dá)，以HO-8910-PM細(xì)胞系為高表達(dá)，可選HO-8910-PM作為靶細(xì)胞進(jìn)行更深入的研究。
　　（4）Notch1信號蛋白下游HES1基因在多種卵巢癌細(xì)胞系中均有表達(dá)。
　　本實驗結(jié)果顯示,Notch1及其下游HES1基因在卵巢癌組織及細(xì)胞系中的表達(dá)提示Notch信號途徑可能是卵巢腫瘤發(fā)生、發(fā)展的機制之一。因此，為腫瘤的基因治療提供了新