苯致再生障礙性貧血小鼠模型的建立及HDAC基因表達水平探討.pdf

1、目的:隨著工業(yè)的發(fā)展，苯作為一種常用工業(yè)原料其應(yīng)用也愈加廣泛，隨之帶來的苯中毒致血液系統(tǒng)疾病的問題也更加明顯。苯可經(jīng)多途徑進入人體，抑制骨髓的造血能力，導(dǎo)致骨髓造血衰竭如再生障礙性貧血（再障）等，然而苯中毒機制尚未闡明，建立一種穩(wěn)定有效的苯誘導(dǎo)再障模型以研究苯的致病機制是非常必要的。本研究探討了建立苯誘發(fā)小鼠再障模型的方法以提供致病機制研究的動物模型平臺。苯致造血系統(tǒng)疾病機制經(jīng)過多年研究仍未完全闡明，本課題組前期研究證明苯染毒骨髓單個核

2、細胞TOPOⅡa啟動子組蛋白H4乙?；接薪档?，推測苯致病機制與體內(nèi)組蛋白乙酰化水平相關(guān)，本研究在苯再障小鼠模型基礎(chǔ)上檢測HDAC基因表達水平的變化以進一步驗證苯造血毒性機制，為更深的機制研究奠定基礎(chǔ)。
　　方法:以雄性CD1小鼠為實驗對象，間斷長期苯蒸氣吸入誘導(dǎo)再生障礙性貧血。
　　(1)造模組按吸入苯蒸氣濃度及吸入時間不同分為四組:B1組(300ppm/2月)、B2組(900ppm/2月)、B3組(300ppm/3月)

3、、B4組(900ppm/3月)，每周5天，每天6小時，以單純吸入空氣組（A組）為對照組，分為A1組（空氣/2月）、A2（空氣/3月）。
　　(2)各分組分別于吸苯前及吸苯結(jié)束兩天后稱取體重及采血（吸入前采用尾靜脈取血法，吸入結(jié)束后采用摘取眼球法取血），計數(shù)白細胞(WBC)、血紅蛋白(HGB)和血小板(PLT);
　　(3)頸椎脫臼法處死小鼠后，用75％酒精中浸泡5分鐘，分離出兩側(cè)股骨并剪去一側(cè)骨骺端，用2mlRPMI1640

4、培養(yǎng)液完全沖出一側(cè)股骨的骨髓細胞，計數(shù)每根股骨中的骨髓有核細胞數(shù)，留取肝、脾、肺和股骨做病理形態(tài)學(xué)觀察，脾臟稱重計算脾體指數(shù)（脾臟指數(shù)=脾質(zhì)量mg/體質(zhì)量g）。
　　(4)將對照組與造模組小鼠骨髓有核細胞懸液用梯度離心法分離出骨髓單個核細胞，提取RNA，進行RT-PCR及凝膠電泳，凝膠成像系統(tǒng)觀察并計算對照組與造模組小鼠的目的基因條帶與內(nèi)部參照基因條帶的灰度值比值，統(tǒng)計分析結(jié)果。
　　結(jié)果:(1)各造模組小鼠與對照組小鼠相比

5、較血三系及骨髓有核細胞計數(shù)均明顯下降，統(tǒng)計學(xué)上有顯著性差異。B1組與B2組相比以及B3與B4相比，白細胞計數(shù)及血紅蛋白檢測結(jié)果無明顯差異，提示苯蒸氣濃度高于300ppm后，過高濃度并未造成更明顯的造血衰竭，而隨著時間延長骨髓衰竭可加重。肝脾骨髓病理形態(tài)學(xué)檢查均有造血細胞的減少，而非造血細胞如脂肪細胞和淋巴細胞等增加，肺部可見肺泡數(shù)目減少，間質(zhì)細胞增多，肺間質(zhì)增厚，膠原纖維沉積增多。結(jié)合血三系、BMNC計數(shù)及病理形態(tài)觀察結(jié)果，提示苯致小鼠