苯致再生障礙性貧血小鼠模型的建立及HDAC基因表達(dá)水平探討.pdf

1、目的:隨著工業(yè)的發(fā)展，苯作為一種常用工業(yè)原料其應(yīng)用也愈加廣泛，隨之帶來的苯中毒致血液系統(tǒng)疾病的問題也更加明顯。苯可經(jīng)多途徑進(jìn)入人體，抑制骨髓的造血能力，導(dǎo)致骨髓造血衰竭如再生障礙性貧血（再障）等，然而苯中毒機(jī)制尚未闡明，建立一種穩(wěn)定有效的苯誘導(dǎo)再障模型以研究苯的致病機(jī)制是非常必要的。本研究探討了建立苯誘發(fā)小鼠再障模型的方法以提供致病機(jī)制研究的動(dòng)物模型平臺(tái)。苯致造血系統(tǒng)疾病機(jī)制經(jīng)過多年研究仍未完全闡明，本課題組前期研究證明苯染毒骨髓單個(gè)核

2、細(xì)胞TOPOⅡa啟動(dòng)子組蛋白H4乙?；接薪档?，推測苯致病機(jī)制與體內(nèi)組蛋白乙?；较嚓P(guān)，本研究在苯再障小鼠模型基礎(chǔ)上檢測HDAC基因表達(dá)水平的變化以進(jìn)一步驗(yàn)證苯造血毒性機(jī)制，為更深的機(jī)制研究奠定基礎(chǔ)。
　　方法:以雄性CD1小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，間斷長期苯蒸氣吸入誘導(dǎo)再生障礙性貧血。
　　(1)造模組按吸入苯蒸氣濃度及吸入時(shí)間不同分為四組:B1組(300ppm/2月)、B2組(900ppm/2月)、B3組(300ppm/3月)

3、、B4組(900ppm/3月)，每周5天，每天6小時(shí)，以單純吸入空氣組（A組）為對(duì)照組，分為A1組（空氣/2月）、A2（空氣/3月）。
　　(2)各分組分別于吸苯前及吸苯結(jié)束兩天后稱取體重及采血（吸入前采用尾靜脈取血法，吸入結(jié)束后采用摘取眼球法取血），計(jì)數(shù)白細(xì)胞(WBC)、血紅蛋白(HGB)和血小板(PLT);
　　(3)頸椎脫臼法處死小鼠后，用75％酒精中浸泡5分鐘，分離出兩側(cè)股骨并剪去一側(cè)骨骺端，用2mlRPMI1640

4、培養(yǎng)液完全沖出一側(cè)股骨的骨髓細(xì)胞，計(jì)數(shù)每根股骨中的骨髓有核細(xì)胞數(shù)，留取肝、脾、肺和股骨做病理形態(tài)學(xué)觀察，脾臟稱重計(jì)算脾體指數(shù)（脾臟指數(shù)=脾質(zhì)量mg/體質(zhì)量g）。
　　(4)將對(duì)照組與造模組小鼠骨髓有核細(xì)胞懸液用梯度離心法分離出骨髓單個(gè)核細(xì)胞，提取RNA，進(jìn)行RT-PCR及凝膠電泳，凝膠成像系統(tǒng)觀察并計(jì)算對(duì)照組與造模組小鼠的目的基因條帶與內(nèi)部參照基因條帶的灰度值比值，統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果。
　　結(jié)果:(1)各造模組小鼠與對(duì)照組小鼠相比

5、較血三系及骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)均明顯下降，統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性差異。B1組與B2組相比以及B3與B4相比，白細(xì)胞計(jì)數(shù)及血紅蛋白檢測結(jié)果無明顯差異，提示苯蒸氣濃度高于300ppm后，過高濃度并未造成更明顯的造血衰竭，而隨著時(shí)間延長骨髓衰竭可加重。肝脾骨髓病理形態(tài)學(xué)檢查均有造血細(xì)胞的減少，而非造血細(xì)胞如脂肪細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等增加，肺部可見肺泡數(shù)目減少，間質(zhì)細(xì)胞增多，肺間質(zhì)增厚，膠原纖維沉積增多。結(jié)合血三系、BMNC計(jì)數(shù)及病理形態(tài)觀察結(jié)果，提示苯致小鼠