重組雞α干擾素-白細(xì)胞介素-2復(fù)合蛋白在雞體內(nèi)外抗病毒活性研究.pdf

1、為了研究重組雞α干擾素/白細(xì)胞介素-2復(fù)合蛋白（rChIFN-α-Linker-ChIL-2，重組復(fù)合蛋白）在雞體內(nèi)外抗病毒活性,本研究采用50％細(xì)胞病變抑制法進(jìn)行了重組復(fù)合蛋白在 CEF細(xì)胞上抗水泡性口炎病毒（VSV）和傳染性法氏囊病病毒（IBDV） LX強毒株的活性研究；采用 MTS法進(jìn)行了重組復(fù)合蛋白促外周血T淋巴細(xì)胞（PBLC）和脾臟淋巴細(xì)胞增殖活性試驗。將IBDV LX強毒株人工感染24日齡SPF雞，分別于攻毒前3d（攻毒前組

2、）、攻毒同時（同時組）、攻毒后24h（攻毒后組）使用重組復(fù)合蛋白，以篩選重組復(fù)合蛋白最佳使用時間試驗。將IBDV LX強毒株人工感染24日齡SPF雞，分別肌肉注射重組復(fù)合蛋白（注射組）與滴鼻點眼重組復(fù)合蛋白（滴鼻點眼組）進(jìn)行最佳使用途徑篩選試驗。分別通過臨床觀察、檢測攻毒前和攻毒后（days post challenge，dpc）不同時間排毒率、病毒在不同組織器官的動態(tài)分布、帶毒時間、細(xì)胞免疫水平、體液免疫水平和分析外周血淋巴細(xì)胞亞群等

3、指標(biāo)的差異以揭示重組復(fù)合蛋白在雞體內(nèi)抗病毒和免疫增強作用機理，并且篩選重組復(fù)合蛋白在雞體內(nèi)發(fā)揮最佳抗病毒活性的最適使用時間和途徑。
　　結(jié)果：重組復(fù)合蛋白在 CEF細(xì)胞上抗 VSV和 IBDV的活性單位分別為5.24×105 IU/mL和1.64×104IU/mL；重組復(fù)合蛋白具有顯著的促 PBLC和雞脾臟淋巴細(xì)胞的增殖活性。不同時間使用使用重組復(fù)合蛋白在雞體的抗病毒活性存在差異。同時組傳染性法氏囊?。↖BD）典型癥狀持續(xù)時間、病

4、死率、排毒率、外周血持續(xù)帶毒率（72h、20％、31.6%、31.6%）最低，其次是攻毒前組（96h、30％、36.8%、36.2%）、攻毒后組（120h、40%、42.1%、47.4%）和攻毒陽性對照組（168h、70％、57.9%、52.6%）；同時組和攻毒前組雞組織器官帶毒時間比攻毒后組和攻毒陽性對照組縮短7d；同時組的組織器官帶毒率（20.4%）顯著低于攻毒前組和攻毒后組（27.1%、29.2%）；同時組雞血清抗 IBDV抗體水

5、平顯著低于其它組；同時組雞的血清中ChIL-2、ChIFN-γ、ChIL-6、ChIL-4表達(dá)水平（7 dpc~21 dpc）、ChIFN-α表達(dá)水平（7 dpc~14 dpc）顯著高于其它組；3 dpc~14 dpc同時組雞外周血T淋巴細(xì)胞、脾臟淋巴細(xì)胞增殖活性顯著高于其他試驗組；7 dpc~21 dpc攻毒組的CD4+/CD8+的比值顯著低于其相應(yīng)的對照組，同時組雞外周血的 CD4+/CD8+的比值顯著高于其他攻毒組。不同途徑使用重

6、組復(fù)合蛋白在雞體的抗病毒活性存在差異。注射組雞 IBD臨床癥狀持續(xù)時間、病死率、排毒率、外周血持續(xù)帶毒率（96h、30%、54.5%、32％）最低，其次是滴鼻點眼組（120h、50%、81.8%、48％）；注射組雞不同器官的帶毒時間、抗IBDV抗體水平顯著低于其它組；注射組血清中 ChIL-2、ChIL-4、ChIL-6、ChIFN-r表達(dá)水平（7 dpc~21 dpc）、ChIFN-α表達(dá)水平（7 dpc~14 dpc）、雞外周血 T

7、淋巴細(xì)胞與雞脾臟淋巴細(xì)胞增殖活性、外周血中 CD4+/CD8+細(xì)胞的比值最高，其次是滴鼻點眼組和攻毒陽性對照組。
　　結(jié)論：重組復(fù)合蛋白在體外具有顯著的抗 VSV和 IBDV活性及促外周血 T淋巴細(xì)胞、促脾臟淋巴細(xì)胞增殖活性；重組復(fù)合蛋白通過提高機體細(xì)胞因子的表達(dá)水平、增強脾臟淋巴細(xì)胞和外周血 T淋巴細(xì)胞增殖活性、提高 CD4+/CD8+細(xì)胞的比值等方式增強機體細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答水平，發(fā)揮其抗病毒活性；攻毒同時采用注射途徑使用