2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的: 基因甲基化在細胞的形成發(fā)育中發(fā)揮調(diào)控作用,目前關(guān)于其研究主要集中在啟動子甲基化方面。雄激素受體(AndrogenReceptor,AR)啟動子甲基化研究以往多集中在性激素依賴性腫瘤,而在性激素非依賴性腫瘤報道很少,在白血病中更未見相關(guān)報道,本實驗利用MSP方法檢測白血病中AR啟動子甲基化情況,揭示其異常甲基化狀態(tài),同時利用去甲基化試劑5-AzaDC處理白血病細胞,分析處理前后AR基因啟動子的甲基化狀態(tài)、mRNA和蛋白表達

2、的變化,分析5-AzaDC影響基因表達的可能機制,以揭示白血病AR基因啟動子甲基化變化情況與基因表達的關(guān)系,為腫瘤的形成與DNA甲基化的關(guān)系提供理論依據(jù),從而為腫瘤的治療提供新的方向。 方法: 1.白血病細胞株HL-60、MOLT-4、Jurkat的培養(yǎng)以及5-AzaDC對細胞株的處理。 2.利用MSP檢測白血病細胞株和正常人白細胞AR基因啟動子的甲基化狀態(tài),分析兩者的差異。 3.利用MSP檢測在5-Az

3、aDC處理白血病細胞株后AR啟動子CpG島甲基化狀態(tài)變化。 4.運用:RT-PCR檢測5-AzaDC處理前后白血病細胞株ARmRNA的表達變化。 5.運用免疫組化和westernblot分別檢測5-AzaDC處理前后AR蛋白的表達變化,同時察AR在細胞中的表達位置。 6.運用MSP檢測白血病患者骨髓標本AR啟動子CpG島甲基化情況,分析白血病細胞AR啟動子CpG島甲基化檢測的臨床診斷治療價值。 結(jié)果:

4、 1.MSP檢測白血病細胞株HL-60、MOLT-4、Jurkat和正常人白細胞AR啟動子甲基化顯示:在三株白血病細胞,AR啟動子CpG島檢出部分甲基化,而正常人白細胞顯示未甲基化。 2.5-AzaDC處理HL-60、MOLT-4、Jurkat后,AR啟動子CpG島發(fā)生去甲基化。 3.白血病細胞中存在ARmRNA表達。 4.白血病細胞株經(jīng)5-AzaDC處理后ARmRNA表達發(fā)生變化,較處理前ARmRNA表達升

5、高。 5.白血病細胞株經(jīng)5-AzaDC處理后AR蛋白表達發(fā)生變化,較處理前AR蛋白表達升高。 6.利用MSP檢測15例白血病患者骨髓細胞AR啟動子CpG島甲基化情況,結(jié)果在15例白血病患者骨髓標本中均檢出AR基因啟動子區(qū)發(fā)生甲基化,其中12例(12/15)標本呈部分甲基化狀態(tài),3例(3/15)標本呈高甲基化狀態(tài)。 結(jié)論: 1.白血病細胞株雄激素受體啟動子CpG島存在異常甲基化狀態(tài),而正常人白細胞為未甲基化

6、狀態(tài),AR啟動子甲基化可能是白血病的分子遺傳改變之一。 2.5-AzaDC可以使白血病細胞株AR啟動子CpG島發(fā)生去甲基化,這種作用為表觀遺傳學紊亂調(diào)節(jié)的治療提供了新的方向。 3.白血病細胞株經(jīng)5-AzaDC處理后ARmRNA表達升高,說明去甲基化試劑5-AzaDC對AR基因的轉(zhuǎn)錄水平表達有一定的作用,AR基因mRNA表達的增加可能與AR啟動子的去甲基化有關(guān)。 4.白血病細胞株經(jīng)5-AzaDC處理后AR蛋白表達存

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