1、【目的】：
了解基層醫(yī)院銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa，Pa）的耐藥情況，明確銅綠假單胞菌產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶的種類，分析其對耐藥性的影響,探討耐藥菌外膜孔蛋白OprD2基因缺失及β-內(nèi)酰胺酶耐藥基因的攜帶在Pa耐β-內(nèi)酰胺類抗生素中的作用，探討分析銅綠假單胞菌對β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥機(jī)制。為預(yù)防和控制耐藥菌株在基層醫(yī)院的出現(xiàn)和傳播、指導(dǎo)基層醫(yī)院臨床合理應(yīng)用抗生素提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。
【方法】：
2、r> 1.銅綠假單胞菌對抗生素的敏感性測定：采用法國梅里埃生物公司的VITEK-2全自動微生物鑒定及藥敏分析儀測定90株臨床分離株對15種抗生素的敏感性。
2.銅綠假單胞菌β-內(nèi)酰胺酶的檢測:
(1)采用改良三維試驗(yàn)測定超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）、頭孢菌素酶（AmpC）。
(2)采用IMP-EDTA紙片協(xié)同試驗(yàn)檢測金屬β-內(nèi)酰胺酶（MBLs）。
3.采用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)對產(chǎn)酶菌常
3、見的18種β-內(nèi)酰胺酶及外膜蛋白OprD2基因基因擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳,陽性產(chǎn)物再進(jìn)行測序分析。
【結(jié)果】：
1.90株銅綠假單胞菌對15種抗生素的藥敏結(jié)果：敏感性較高的6種抗生素依次為阿米卡星、美羅培南、頭孢吡肟、左氧氟沙星、亞胺培南、頭孢他啶，其敏感率分別為75.5％、71.1%、70.0%、67.8%、66.7%、65.6%。對銅綠假單胞菌耐藥率較高的抗生素依次是呋喃妥因、頭孢曲松、頭孢噻肟、哌拉西
4、林，其耐藥率分別為95.6%、83.4%、67.8%、48.9%。
2.90株銅綠假單胞菌中,β-內(nèi)酰胺酶產(chǎn)酶率為27.8%(25/90)。25株產(chǎn)酶菌中，產(chǎn)金屬β-內(nèi)酰胺酶的菌株9株，占36.0%（9/25）；產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)的菌株7株，占28.0%(7/25)；產(chǎn)AmpC酶的的菌株6(6/25)株，占24.0%；同時(shí)產(chǎn)ESBLs和AmpC酶的菌株3株，占12.0%(3/25)。
3.產(chǎn)酶菌株藥敏
5、試驗(yàn)結(jié)果顯示，除呋喃妥因外，對其他抗生素耐藥率，產(chǎn)酶菌明顯高于非產(chǎn)酶菌（P<0.05），產(chǎn)酶菌株對β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥嚴(yán)重，且同時(shí)存在對喹諾酮類、氨基糖苷類等抗生素耐藥（多重耐藥）。檢出多重耐藥銅綠假單胞菌（MDRPA）31株，占34.4%。這些菌株主要分布在痰標(biāo)本中，占51.7%。ICU和呼吸內(nèi)科銅綠假單胞菌檢出率較高，分別為40.0%和26.7%。ICU中MDRPA株檢出率最高，為54.8%。
4．25株產(chǎn)酶菌 PCR結(jié)
6、果顯示：β-內(nèi)酰胺酶基因 OXA-10陽性的有7株，占28.0%(7/25)，VIM-2陽性的有3株，占12.0%（3/25），16個菌株OprD2基因缺失，占64.0%（16/25），其余基因均未檢出。
【結(jié)論】：
1.基層醫(yī)院銅綠假單胞菌的耐藥現(xiàn)狀較嚴(yán)重，出現(xiàn)多重耐藥菌株且分布較廣泛。
2．基層醫(yī)院銅綠假單胞菌中有近三分一的菌株產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶，產(chǎn)酶菌耐藥率明顯高于非產(chǎn)酶菌，產(chǎn)酶菌株對β-內(nèi)酰胺類抗生素
