RNA干擾C1QBP表達(dá)逆轉(zhuǎn)絨癌化療耐藥性的研究.pdf

1、背景和目的:絨癌是發(fā)生于育齡女性的高度惡性實(shí)體瘤,對化療敏感。發(fā)生化療耐藥是其治療失敗的主要原因。深入了解絨癌耐藥機(jī)制以逆轉(zhuǎn)絨癌耐藥具有重要臨床意義。自噬是細(xì)胞應(yīng)對代謝壓力的重要分解反應(yīng),降解細(xì)胞中去折疊或聚合的蛋白和細(xì)胞器等大分子物質(zhì),維持細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài),與多種疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。有研究證實(shí)自噬促進(jìn)腫瘤細(xì)胞對化療耐藥,抑制自噬可能逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥。C1QBP是一種多功能蛋白,本課題組前期研究已發(fā)現(xiàn)C1QBP在絨癌耐藥細(xì)胞株中表達(dá)高于敏感細(xì)

2、胞株,并以調(diào)節(jié)細(xì)胞自噬的方式參與絨癌耐藥,沉默C1QBP表達(dá)可能作為自噬的抑制子用于逆轉(zhuǎn)絨癌耐藥。本研究擬探討C1QBP與蛋白降解及選擇性自噬的關(guān)系,并通過動物實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探討C1QBP參與絨癌耐藥的相關(guān)機(jī)制。
　　 研究方法:構(gòu)建靶向C1QBP基因的shRNA慢病毒表達(dá)載體,慢病毒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染絨癌耐藥細(xì)胞干擾C1QBP表達(dá)；蛋白免疫印跡法(western blot)檢測C1QBP RNA干擾效率；CCK-8法檢測干擾C1QBP前后絨

3、癌耐依托泊苷(VP16)耐藥細(xì)胞株Jeg3/VPC IC50及耐藥指數(shù)(RI)的變化；行細(xì)胞裸鼠皮下成瘤,腹腔注射MTX或VP16,觀察腫瘤體積和重量變化,構(gòu)建絨癌體內(nèi)化療耐藥動物模型,檢驗(yàn)沉默C1QBP表達(dá)對絨癌細(xì)胞體內(nèi)耐藥性的影響；并同時(shí)在細(xì)胞和裸鼠皮下移植瘤組織中檢測自噬特異性受體蛋白p62與C1QBP的共表達(dá)。
　　 研究結(jié)果:成功構(gòu)建C1QBP shRNA慢病毒表達(dá)載體并轉(zhuǎn)染絨癌耐藥細(xì)胞株Jeg3/VPc,獲得C1QB

4、P RNAi高效抑制的細(xì)胞,基因沉默效率隨細(xì)胞傳代遞減;沉默Jeg3/VPCC1QBP表達(dá)顯著降低細(xì)胞VP16 IC50及RI(P<0.05),其耐藥性下降比例達(dá)92.86％；C1QBP基因敲除(Knock down,KD)組細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)成瘤延遲,與對照組細(xì)胞相比C1QB KD組細(xì)胞VP16作用后體積抑瘤率和重量抑瘤率均升高；在體外培養(yǎng)細(xì)胞中,沉默C1QBP表達(dá)伴隨p62表達(dá)上調(diào),且P62結(jié)構(gòu)表型發(fā)生變化；裸鼠皮下移植瘤組織中均檢測出