大鼠子宮全層損傷修復模型的實驗研究.pdf

1、目的：
　　 建立SD大鼠子宮全層損傷后修復模型，并探索大鼠子宮損傷后形態(tài)及功能重建的規(guī)律，為組織工程修復子宮的研究提供合適的動物模型及理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 1.選取SD大鼠為實驗動物，制備子宮全層損傷后修復模型，根據(jù)子宮損傷范圍不同分為A組(0.5×0.5cm2)、B組(1.0×0.5cm2)、C組(1.5×0.5cm2)、D組(假手術(shù))四組，對大鼠的圍手術(shù)期和術(shù)后恢復情況以及子宮創(chuàng)面的愈合情況進行觀

2、察。
　　 2.SD大鼠在子宮全層損傷術(shù)后1周、2周、4周、8周、12周，每次10只大鼠20只子宮取材，取材范圍包括雙側(cè)子宮全層，以D組假手術(shù)子宮為對照組。取材后記錄子宮狹窄、堵塞情況，將宮腔通暢的子宮固定，取手術(shù)區(qū)中央部位組織連續(xù)切片，行HE染色、Masson染色和免疫組織化學染色。
　　 3.SD大鼠子宮全層損傷術(shù)后12周，20只大鼠共40只子宮分為四組。選擇已證明有生育能力的SPF級成年雄性SD大鼠，與受試雌鼠1:

3、1連續(xù)合籠交配過夜，以托盤查見陰栓的首日記為妊娠0日，同時觀察雌鼠體重及腹形變化，于妊娠中晚孕期開腹探查受試雌鼠雙側(cè)子宮的受孕情況及胚胎情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.雌性SD大鼠的生殖器官解剖特點為：子宮呈“Y”形，左右兩側(cè)子宮完全分開，形成兩個單獨的子宮，長約2.5～3cm，有兩個獨立的子宮頸，分別開口于陰道；雙側(cè)輸卵管色澤紅潤，粗細均勻，在宮角末端包繞卵巢；子宮動脈支由卵巢動脈發(fā)出，系膜緣血運豐富。手術(shù)建模過程順利

4、，術(shù)后麻醉復蘇順利，手術(shù)切口未見感染、血腫等并發(fā)癥。預期時間段行組織學和功能學實驗。
　　 2.大體觀察：術(shù)后各時間段A組子宮多為通暢，B組、C組宮腔堵塞、積液、膿腫較多。術(shù)后1周，手術(shù)區(qū)炎癥反應明顯，局部管腔狹窄、凹陷；2周炎癥開始減退，A組、B組創(chuàng)面已被組織覆蓋，C組仍有創(chuàng)面尚未完全閉合；2周至4周，A組、B組局部管徑漸接近兩側(cè)正常子宮，C組管腔仍有狹窄；4周至12周，手術(shù)區(qū)外觀漸接近正常。
　　 3.宮腔通暢率比較

5、：A、B、C三組子宮全層損傷術(shù)后宮腔通暢率分別為：96％、84％、56％，采用x2檢驗進行比較，三組間差異有統(tǒng)計學意義(P=0.002)。兩兩比較A組與C組差異有統(tǒng)計學意義(P=0.001)。
　　 4.手術(shù)區(qū)子宮內(nèi)膜厚度測量：A組子宮內(nèi)膜厚度隨術(shù)后時間的延長而增厚，術(shù)后1周，手術(shù)區(qū)子宮內(nèi)膜很薄，術(shù)后1～2周增加明顯，2周以后增加趨勢漸緩。B組、C組手術(shù)區(qū)子宮內(nèi)膜薄弱，且隨術(shù)后時間的延長未見明顯增厚。同一時間點A、B、C三組手術(shù)

6、區(qū)子宮內(nèi)膜厚度比較：A組與B組相比，術(shù)后8周(P<0.05)、12周(P<0.05)差異有統(tǒng)計學意義；A組與C組相比，術(shù)后2周(P<0.05)、4周(P<0.01)、8周(P<0.01)、12周(P<0.01)差異均有統(tǒng)計學意義。
　　 5.HE染色觀察上皮再生：術(shù)后1周，光鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，A、B、C三組手術(shù)區(qū)即可見單層柱狀上皮細胞再生，排列緊密，與其下內(nèi)膜固有層界限清晰。
　　 6.Masson染色觀察膠原纖維和平滑?。?/p>

7、術(shù)后2周，手術(shù)區(qū)膠原纖維含量較多，細胞數(shù)目較少，手術(shù)區(qū)肌壁由內(nèi)膜及纖維結(jié)締組織替代，平滑肌纖維少見或未見。
　　 7.平滑肌肌動蛋白α-SMA姒免疫組織化學染色觀察平滑肌修復：同一時間點A、B、C三組手術(shù)區(qū)平滑肌細胞含量(α-SMA％)比較：A組與B組相比，術(shù)后4周(P<0.05)、12周(P<0.01)差異有統(tǒng)計學意義；A組與C組相比，4周(P<0.01)、8周(P<0.01)、12周(P<0.01)差異均有統(tǒng)計學意義。

8、>　　 8.SD大鼠子宮全層損傷術(shù)后12周功能學評價：A組、B組、C組、D組妊娠率分別為：80％、60％、30％、100％，四組妊娠率比較差異有統(tǒng)計學意義(P=0.006)，兩兩比較C組與D組間差異有統(tǒng)計學意義(P=0.003)。其中，A組37.5％的妊娠子宮手術(shù)區(qū)可見正常發(fā)育至晚孕期的胚胎，B組、C組手術(shù)區(qū)見胚胎、胎盤枯萎現(xiàn)象。
　　 結(jié)論：
　　 1.利用實驗動物SD大鼠構(gòu)建子宮全層損傷后修復的模型，并進一步對不同

9、損傷程度的修復過程進行組織學、功能學評價；
　　 2.大鼠子宮內(nèi)膜上皮細胞有較強的再生能力，術(shù)后1周，不同損傷范圍(0.5×0.5cm2～1.5×0.5cm2)子宮內(nèi)膜上皮層均可完全愈合；
　　 3.大鼠子宮平滑肌再生能力弱，早期肌壁主要通過纖維瘢痕連接，隨時間延長可有肌細胞再生；
　　 4.子宮損傷后形態(tài)學的自然修復與損傷程度有關：0.5×0.5cm2損傷后，子宮形態(tài)結(jié)構(gòu)修復較好；1.0×0.5cm2損傷后，子