慢性低灌注大鼠神經(jīng)血管單元與淀粉樣物質(zhì)的關(guān)系及丁苯酞的神經(jīng)保護(hù)的研究.pdf

1、阿爾茨海默病(Alzheimer Disease，AD)至今發(fā)病機(jī)制仍不清楚。其中60歲以上AD者80%以上具有CAA。二者均有淀粉樣物質(zhì)Aβ的沉積。其中Aβ40沉積在血管壁。慢性低灌注、淀粉樣物質(zhì)的沉積、神經(jīng)血管單元的損傷都與AD的發(fā)病有著密切的關(guān)系。盡管如此，到目前為止，這三者之間的關(guān)系鮮有報(bào)導(dǎo)，所以本研究的第一個(gè)任務(wù)是利用雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎創(chuàng)造慢性低灌注大鼠模型，探討慢性低灌注、淀粉樣物質(zhì)的沉積和神經(jīng)血管單元損傷三者之間的關(guān)系。

2、r>　　 丁苯酞是從芹菜的菜籽中分離得到的主要藥效成分，在當(dāng)歸、川穹、茶穹等中藥和天然植物中均有發(fā)現(xiàn)，具有抗驚厥、解痙、平喘等多種藥效作用。丁苯酞對AD病的治療作用屢有報(bào)導(dǎo)，但是具體機(jī)制尚不清楚。本論文的第二個(gè)任務(wù)將研究丁苯酞對慢性低灌注與淀粉樣物質(zhì)的沉積和神經(jīng)血管單元損傷關(guān)系的影響來初步探討丁苯酞治療AD病的機(jī)制。
　　 第一部分慢性低灌注和淀粉樣物質(zhì)關(guān)系的研究
　　 目的：
　　 研究丁苯酞處理對慢性低灌注

3、后腦組織中APP，MMP-2和MMP-9表達(dá)量以及淀粉樣物質(zhì)沉積和認(rèn)知功能的影響。
　　 方法：
　　 雄性大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、缺血組和丁苯酞組，按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法處理后，采取Western blot法測定不同時(shí)間腦組織中APP，MMP-2和MMP-9的表達(dá)量，并監(jiān)測淀粉樣物質(zhì)、MMP-2和MMP-9在血管壁的沉積情況，進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)評價(jià)大鼠認(rèn)知功能。
　　 結(jié)果：
　　 1.Western b

4、lot分析表明：缺血2個(gè)月后大鼠皮層中APP，MMP-2的表達(dá)明顯升高，而MMP-9表達(dá)未見明顯變化；腦缺血后大鼠海馬中MMP-2，MMP-9的表達(dá)均未見顯著改變。丁苯酞處理30天和60天后，腦皮層中APP和MMP-2的表達(dá)量與腦缺血組相比有了顯著的下降，而MMP-9的表達(dá)量沒有變化：丁苯酞處理7，14，30，60天后，海馬中APP，MMP-2，MMP-9的表達(dá)量均沒有變化。
　　 2.免疫組化結(jié)果表明：腦慢性低灌注3天后MMP

5、-2和Ap40在靜脈血管內(nèi)皮上有顯著沉積，14天后在動脈血管內(nèi)皮上有顯著沉積；
　　 3.Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：慢性低灌注后1月丁苯酞治療組記憶功能有所改善。
　　 結(jié)論：
　　 研究表明，MMP-9與Aβ的前體蛋白β-APP無明確的相關(guān)性，MMP-2可能參與了血腦屏障的破壞以及淀粉樣物質(zhì)的沉積。丁苯酞能干預(yù)淀粉樣物質(zhì)的沉積，延緩血管病變，改善慢性低灌注后的認(rèn)知功能。
　　 第二部分慢性低灌注后

6、影像學(xué)的變化研究
　　 目的：
　　 建立雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎動物模型探討慢性低灌注后海馬影像學(xué)變化及其病理改變與認(rèn)知功能減退的關(guān)系。
　　 方法：
　　 雄性大鼠隨機(jī)分為缺血組和假手術(shù)組，采用雙側(cè)頸總動脈永久結(jié)扎方法制作慢性腦缺血動物模型。采用Morris水迷宮檢測大鼠空間學(xué)習(xí)記憶功能，并對低灌注大鼠進(jìn)行頭顱MRI掃描及海馬體積測量。尼氏染色觀察海馬神經(jīng)元形態(tài)及數(shù)目變化。
　　 結(jié)果：
　　

7、 1.與假手術(shù)組相比，缺血組大鼠記憶功能出現(xiàn)明顯障礙。
　　 2.影像學(xué)結(jié)果表明：缺血組慢性低灌注后3個(gè)月開始出現(xiàn)海馬體積縮小，局部內(nèi)嗅皮層萎縮，局部蛛網(wǎng)膜下腔增寬。
　　 3.病理檢測結(jié)果表明：缺血1月時(shí)海馬CA1區(qū)即可見神經(jīng)元減少，形態(tài)欠規(guī)則，細(xì)胞皺縮。3月時(shí)神經(jīng)元損害更加明顯。
　　 結(jié)論：
　　 2VO后全腦血流下降，海馬及局部內(nèi)嗅皮層長期腦血流下降，海馬體積變小，神經(jīng)元缺失，影響了與記憶相關(guān)的突

8、觸聯(lián)系通路，造成認(rèn)知功能減退，海馬的影像學(xué)改變相對滯后于病理改變。
　　 第三部分慢性低灌注后神經(jīng)血管單元的變化研究
　　 目的：用大鼠雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎方法制作模型，觀察慢性低灌注大鼠血腦屏障通透性改變，電鏡觀察神經(jīng)血管單元的超微結(jié)構(gòu)的改變。
　　 方法：
　　 雄性大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、缺血組、丁苯酞組，按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的方法測定腦組織伊文思藍(lán)含量以反映血腦屏障的完整性，并用電鏡觀察神經(jīng)血管單元的超微結(jié)構(gòu)的

9、改變。
　　 結(jié)果：
　　 1.腦組織伊文思藍(lán)含量測定結(jié)果表明：缺血組7d亞組大鼠腦組織伊文思藍(lán)含量高于假手術(shù)組及丁苯酞組。
　　 2.伊文思藍(lán)染色及電鏡結(jié)果表明：缺血組7d亞組血腦屏障明顯受損，假手術(shù)組血腦屏障完整，丁苯酞組受損較?。浑S著時(shí)間的延長，受損血腦屏障完全修復(fù)，與假手術(shù)組無差異。
　　 結(jié)論：
　　 慢性低灌注后有神經(jīng)元凋亡，血腦屏障遭到破壞，丁苯酞對血腦屏障有保護(hù)作用：隨著時(shí)間的進(jìn)行