山羊胎盤(pán)催乳素的不同檢測(cè)方法及其在胎盤(pán)組織的定位研究.pdf

1、胎盤(pán)在提供胎兒理想的生長(zhǎng)環(huán)境中扮演重要的角色，它不但是母體與胎兒之間營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和代謝產(chǎn)物的轉(zhuǎn)運(yùn)位點(diǎn)，而且還是抗病原的屏障，以及分泌激素、生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子和其它生物活性物質(zhì)的器官。反芻動(dòng)物的胎盤(pán)催乳素屬于生長(zhǎng)激素/催乳素基因家族，它們由滋養(yǎng)外胚層雙核細(xì)胞合成。胎盤(pán)催乳素的結(jié)構(gòu)和生物活性在牛、綿羊和山羊上都已經(jīng)進(jìn)行過(guò)研究。與生長(zhǎng)激素相比，反芻動(dòng)物胎盤(pán)催乳素與垂體催乳素具有更大的結(jié)構(gòu)同源性，雖然它們都能與催乳素和生長(zhǎng)素受體結(jié)合。山羊胎盤(pán)催乳素

2、和綿羊胎盤(pán)催乳素分子量都在23000Da，然而，牛胎盤(pán)催乳素由于糖基化的作用分子量要大(31000Da到34000Da之間)。胎盤(pán)催乳素既分泌到胎兒血液循環(huán)中也分泌到母體血液循環(huán)中。胎兒體內(nèi)胎盤(pán)催乳素的濃度隨妊娠的進(jìn)行而逐漸增高，鑒于此，母體血液循環(huán)中的胎盤(pán)催乳素的濃度妊娠后1/3時(shí)期達(dá)到高峰并且維持較高的水平。此外，山羊和綿羊母體胎盤(pán)催乳素的濃度比牛的胎盤(pán)催乳素濃度高100～1000倍。雖然從胎盤(pán)的重量和營(yíng)養(yǎng)看，胎盤(pán)好象起到重要的作用

3、，但是調(diào)控胎盤(pán)催乳素分泌的確切因素尚不明確。 本實(shí)驗(yàn)利用來(lái)自屠宰場(chǎng)和剖腹產(chǎn)獲取的胎盤(pán)和血液，通過(guò)運(yùn)用普通光學(xué)顯微鏡和透射電子顯微鏡對(duì)胎盤(pán)組織中的各類細(xì)胞，尤其是滋養(yǎng)層單核和雙核細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)的觀察，達(dá)到確定細(xì)胞種類并且分析細(xì)胞相關(guān)成分的目的；通過(guò)聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)檢測(cè)胎盤(pán)組織中相關(guān)蛋白質(zhì)的表達(dá)情況；通過(guò)反轉(zhuǎn)錄．聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)的方法檢測(cè)胎盤(pán)組織和母體血漿中胎盤(pán)催乳素信使RNA(mRNA)。

4、制備小鼠抗重組山羊胎盤(pán)催乳素(rcPL)多克隆抗體，并利用此抗體在山羊胎盤(pán)中定位胎盤(pán)催乳素。用rcPL對(duì)6-8周齡的昆明小鼠進(jìn)行免疫注射制備多抗，第三次加強(qiáng)免疫后第6天采集少許血清，用瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散(AGID)和間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)抗體的產(chǎn)生情況；分娩后立即通過(guò)剖腹產(chǎn)的方法獲得山羊胎盤(pán)組織，用獲得的抗血清通過(guò)免疫組織化學(xué)(IHC)和間接熒光抗體試驗(yàn)(IFA)的方法定位胎盤(pán)催乳素。瓊脂擴(kuò)散檢測(cè)抗原濃度為100μg/ml