丙泊酚通過改變星形膠質(zhì)細(xì)胞THBS-1的表達(dá)水平影響神經(jīng)細(xì)胞功能狀態(tài)的實驗研究.pdf

1、目的:
　　 在動物實驗水平觀察丙泊酚麻醉對大鼠腦內(nèi)星形膠質(zhì)細(xì)胞及神經(jīng)元功能標(biāo)志蛋白的影響,進而在體外細(xì)胞培養(yǎng)實驗中明確丙泊酚對星形膠質(zhì)細(xì)胞THBS-1mRNA及蛋白表達(dá)水平的調(diào)節(jié)作用,觀察丙泊酚對單純培養(yǎng)神經(jīng)元及與星形膠質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)神經(jīng)元突觸密度及突起狀態(tài)的影響。
　　 方法:
　　 ①建立大鼠丙泊酚全身麻醉模型,制備大鼠腦組織石蠟切片,應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測星形膠質(zhì)細(xì)胞及神經(jīng)元標(biāo)志蛋白；②分離、純化培養(yǎng)大鼠大

2、腦皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞,設(shè)置不同濃度和不同時間的丙泊酚處理組,應(yīng)用免疫熒光化學(xué)技術(shù)、RT-PCR及Western blotting檢測丙泊酚對星形膠質(zhì)細(xì)胞THBS-1 mRNA及蛋白表達(dá)的影響；③使用單純培養(yǎng)及與星形膠質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)兩種方式,培養(yǎng)大鼠大腦皮層神經(jīng)元,以不同濃度丙泊酚對其進行處理,應(yīng)用免疫熒光化學(xué)技術(shù)觀察丙泊酚對不同方式培養(yǎng)的神經(jīng)元突觸密度及神經(jīng)突起狀態(tài)的影響。
　　 結(jié)果:
　　 ①動物實驗顯示丙泊酚處理后大鼠

3、大腦皮層內(nèi)THBS-1蛋白的表達(dá)水平增加,而GFAP、MAP2及SynapsinⅠ蛋白表達(dá)水平及分布無明顯改變；②丙泊酚可濃度和時間依賴性地上調(diào)體外培養(yǎng)大鼠大腦皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞的THBS-1 mRNA及蛋白表達(dá)水平,尤以終濃度為30μM和處理時間12h影響最為明顯；③與星形膠質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)的神經(jīng)元突觸密度和突起密集程度均顯著高于單純培養(yǎng)的神經(jīng)元,300μM丙泊酚可引起單純培養(yǎng)神經(jīng)元的突起形態(tài)改變,而30μM丙泊酚可一定程度地增加共培養(yǎng)組神