鼻咽癌中miRNA-146a的表達及其功能的初步研究.pdf

1、[目的]
　　 檢測鼻咽癌組織和細胞中miRNA-146a的表達情況;對miRNA-146a的靶基因進行預測;觀察LMP-1和miRNA-146a靶基因所編碼蛋白(E-cadherin)在鼻咽癌組織和細胞中的表達情況。初步探討miRNA-146a在鼻咽癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用。
　　 [方法]
　　 (1)采用Real Time RT-PCR檢測16例鼻咽非角化性未分化癌、13例鼻咽粘膜慢性炎組織和體外培養(yǎng)的鼻咽癌

2、細胞CNE1、CNE2Z、CNE1-GL中miRNA-146a的表達情況。
　　 (2)應用生物信息學的方法,通過PicTar和TargetScan在線數(shù)據(jù)查詢軟件預測miRNA-146a分子可能參與調(diào)控的靶基因。
　　 (3)采用免疫組織化學SP法檢測LMP-1蛋白和miRNA-146a靶基因所編碼蛋白(E-cadherin)的表達,并分析兩者的相互關系。
　　 [結(jié)果]
　　 (1)臨床病理標本Rea

3、l Time RT-PCR檢測結(jié)果顯示:鼻咽非角化性未分化癌和鼻咽粘膜慢性炎組織中的miRNA-146a的△Ct值分別是5.145±2.138和7.895±2.790,2-△△Ct值分別是8.111和1(P＜0.05)。
　　 (2)鼻咽癌細胞Real Time RT-PCR檢測結(jié)果顯示:CNE1、CNE2Z和CNE1-GL中miRNA-146a的△Ct值分別是12.955±2.648、13.833±1.010和1.154±0.

4、765,2-△△Ct值分別是1、0.946和1.273(CNE1 vs.CNE1-GL,P＜0.05;CNE2Z vs.CNE1-GL,P＜0.05;CNE1 vs.CNE2Z,P＞0.05)
　　 (3)運用PicTar和TargetScan數(shù)據(jù)庫對miRNA-146a進行靶基因預測,經(jīng)過篩選發(fā)現(xiàn)miRNA-146a的其中1個靶基因是CDH1(見圖2.1)。
　　 (4)臨床病理標本免疫組織化學結(jié)果顯示:鼻咽非角化性未

5、分化癌和鼻咽粘膜慢性炎組織織LMP-1的陽性率分別是62.5％和17.9%(P＜0.01);E-cadherin的陽性率分別是56%和100%(P＜0.01);Spearman相關性分析結(jié)果顯示,在鼻咽非角化性未分化癌組織中LMP-1蛋白的表達與E-cadherin蛋白的表達呈負相關關系。
　　 (5)免疫細胞化學結(jié)果顯示:LMP-1在CNE1、CNE2Z、CNE1-GL中的陽性率分別為0、(87.2±1.8)%和(98.4±2

6、.2)%(P＜0.01);E-cadherin的陽性率分別是(44.2±2.6)%、(39±2.4)%和(19±3.2)%(P＜0.01)。
　　 [結(jié)論]
　　 (1)鼻咽非角化性未分化癌組織中miRNA-146a的表達高于鼻咽粘膜慢性炎組織,提示miRNA-146a可能與鼻咽癌的發(fā)生有關,在鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展過程中miRNA-146a可能扮演著癌基因的角色。
　　 (2)miRNA-146a在鼻咽癌細胞CNE1