茶多酚對MPTP-PD小鼠模型神經(jīng)保護作用機制的研究.pdf

1、目的:在帕金森病(Parkinson,PD)小鼠模型基礎上,探討茶多酚(TeaPolyphenols,TP)對1-甲基-4-苯基-1-2-3-6-四氫吡啶(1-methy-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)致小鼠PD模型的多巴胺神經(jīng)元的保護作用及其作用機制,以期揭示茶多酚保護PD的作用途徑,為茶多酚應用PD的臨床提供更多的理論依據(jù)。
　　 方法:選擇69只C57BL雄性小鼠(20-

2、25g)(由上海實驗動物中心提供)清潔級自由攝水和食物,12小時明暗環(huán)境適應一周后進行正式實驗。C57BL/6小鼠69只隨機分為8組,①生理水組(對照組)為生理鹽水(NS)+生理鹽水(NS),②茶多酚組(TP組)為NS+茶多酚(TP),其中TP組又分為TP1組(10mg/kg)、TP2組(30mg/kg)、TP3組(60mg/kg),③PD組(模型組)為Ns+MPTP,④茶多酚保護組(保護組)為TP+PD組,其中TP+PD組又分為TP+

3、PD1組(10mg/kg)、TP+PD2組(30mg/kg)、TP+PD3組(60mg/kg)。在造模前對各組進行爬桿時間及游泳試驗評分的測定。①NS組:腹腔注射生理鹽水②TP組:腹腔注射不同劑量TP(TP1,TP2,TP3),首先每隔2小時,共3次,其后,每隔5小時注射,共2次③PD組:腹腔注射MPTP(20mg/kg),每隔2小時,共3次④TP+PD組:先注射TP(TP+PD1,TP+PD2,TP+PD3),半小時后注射MPTP,參

4、照PD組完成MPTP的注射。TP的注射時間表參照TP組。造模72小時后測定各組小鼠爬桿時間及游泳試驗評分。于造模7天后斷頭,取腦,中腦黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元的免疫組化測定,雙側(cè)紋狀體的細胞因子IL-6、TNF-α因子的測定。
　　 結(jié)果:
　　 1.行為學的測定
　　 ①爬桿時間測定
　　 PD組造模后爬桿的時間與造模前比較明顯延長(P<0.05)；TP+PD1組、TP+PD3組造模后與造模前比較爬桿時間明顯延

5、長(P<0.05)；而TP+PD2組造模后與造模前比較爬桿時間無明顯變化；TP+PD1、TP+PD3組的爬桿時間較TP+PD2組明顯延長(P<0.05)。
　　 ②游泳試驗評分測定
　　 PD組造模后游泳試驗評分與造模前比較明顯降低,統(tǒng)計學上存在顯著差異(P<0.05)；NS組、TP組造模前后游泳試驗評分無明顯差異,TP+PD1組、TP+PD2組、TP+PD3組造模后與造模前比較游泳試驗評分均明顯降低(P<0.05)；造

6、模后PD組與NS組、TP組有明顯差異(P<0.05),PD組較TP+PD1、TP+PD3組、TP+PD2組造模后游泳試驗評分無明顯差異(P>0.05)。TP+PD1、TP+PD3組與TP+PD2組比較無明顯差異(P>0.05)。
　　 2.TH的免疫組化染色
　　 TH染色顯示PD組較NS組黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元明顯減少(P<0.05)；經(jīng)TP預處理后的TP保護組多巴胺神經(jīng)元數(shù)目明顯增加,TP+PD1組、TP+PD2組、TP+

7、PD3組與PD組比較神經(jīng)元數(shù)目明顯增多(P<0.05),TP+PD2組多巴胺神經(jīng)元數(shù)目較TP十PD1、TP+PD3組明顯增多(P<0.05)。NS組、TP組比較統(tǒng)計學無明顯差異(P>0.05)。
　　 3.紋狀體細胞因子的測定
　　 ①IL-6的測定
　　 與NS組、TP組相比,PD組小鼠紋狀體內(nèi)IL-6含量明顯降低(P<0.05)。NS組與TP+PD組小鼠紋狀體內(nèi)IL-6含量無明顯差異(P>0.05)；TP+P

8、D1、TP+PD2和TP+PD3組小鼠紋狀體內(nèi)IL-6含量較PD組明顯升高(P<0.05)；而TP+PD1、TP+PD2組與TP+PD3組相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。TP+PD3組小鼠紋狀體內(nèi)IL-6含量較TP+PD1和TP+PD2組降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 ②TNF-α的測定
　　 Ns組和TP+PD組小鼠紋狀體內(nèi)TNF-α含量與PD組比較,無顯著差異(P>0.05),PD組小鼠紋狀體內(nèi)

9、的TNF-α含量與TP+PD1、TP+PD2和TP+PD3組比較亦無顯著性差異(P>0.05),TP+PD1、TP十PD2組紋狀體區(qū)的TNF-α含量與TP+PD3組比較亦無顯著性差異(P>0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.通過腹腔注射MPTP成功復制PD小鼠模型。茶多酚能改善PD模型小鼠的行為學
　　 2.PD模型小鼠黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元數(shù)目較正常小鼠明顯減少,經(jīng)茶多酚干預的PD模型小鼠黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元數(shù)目明顯增