MPTP損傷的小鼠慢性PD模型制作與評價(jià).pdf

1、帕金森?。≒arkinson’s disease，PD）主要是由中腦黑質(zhì)的多巴胺神經(jīng)元發(fā)生退行性壞死而引起的。直到目前，臨床上還沒有發(fā)現(xiàn)一種可以徹底阻止多巴胺神經(jīng)元發(fā)生退行性變化的有效治療手段。其中最主要的原因就是我們對于引發(fā)這種退行性變化的一系列分子機(jī)制還沒有充分地了解。為了系統(tǒng)地研究PD中多巴胺神經(jīng)元發(fā)生退行性變化的分子機(jī)制，就需要建立一個(gè)接近臨床的、重復(fù)性好的、可控性強(qiáng)的PD動物模型。
　　本研究以C57BL/6小鼠為實(shí)驗(yàn)動

2、物，通過腹腔注射神經(jīng)毒素1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶（MPTP）來制作慢性 PD模型。實(shí)驗(yàn)期間的主要的模型評價(jià)手段有：
　　1.行為學(xué)檢測。在注射的不同時(shí)期，用開野實(shí)驗(yàn)觀察小鼠的自發(fā)行為，以及用平衡木和旋轉(zhuǎn)桿等裝置考察了小鼠的運(yùn)動平衡能力。
　　2.組織病理學(xué)檢查。運(yùn)用一系列組織化學(xué)方法如 MTT檢驗(yàn)，酪氨酸羥化酶（tyrosine hydroxylase，TH）免疫組織化學(xué)方法和尼氏（Nissl）染色法考察

3、了小鼠黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元的損傷程度。
　　3.神經(jīng)生化檢驗(yàn)。利用高效液相色譜—電化學(xué)法(HPLC-EC)測定紋狀體（Striatum）的多巴胺（Dopamine，DA）水平，以考察造模小鼠與正常小鼠相比較情況下，黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元向輸送到紋狀體的多巴胺的減少程度。
　　結(jié)果：
　　1.注射MPTP后10－15min，小鼠會出現(xiàn)震顫、豎尾、豎毛、運(yùn)動遲緩、步態(tài)不穩(wěn)、肢體僵硬,活動明顯減少等現(xiàn)象。旋轉(zhuǎn)桿測試(rotarod)

4、結(jié)果顯示，對照組和處理組在運(yùn)動平衡能力上有顯著性差異（P<0.05）。
　　2.造模組和對照組在 MTT檢驗(yàn)和Nissl染色兩項(xiàng)檢測中并未體現(xiàn)顯著性差異（P>0.05）。但是PD模型的典型病理檢測指標(biāo)——TH免疫組化結(jié)果顯示，模型組SNc區(qū)域的TH陽性神經(jīng)元的數(shù)量明顯少于對照組（P<0.05）。
　　3.HPLC檢測結(jié)果顯示，模型組的紋狀體 DA含量低于對照組，且二者有顯著性差異（P<0.05）。
　　結(jié)論：