SSTF對(duì)MPTP帕金森小鼠治療作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　通過(guò)腹腔注射1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶(MPTP)建立帕金森小鼠模型，觀察對(duì)比各組小鼠的行為學(xué)改變及其中腦神經(jīng)元凋亡的程度，探討黃芩莖葉總黃酮(SSTF)對(duì)MPTP造成的黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用及可能機(jī)制，并對(duì)SSTF的治療效果進(jìn)行評(píng)價(jià)，以期為SSTF治療帕金森病的臨床應(yīng)用奠定一定的理論基礎(chǔ)。
　　方法:
　　一:實(shí)驗(yàn)分組及MPTP帕金森小鼠模型的建立。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為8-10周齡健康雄

2、性C57 BL/6J小鼠32只，隨機(jī)分為4組。(1)A組:空白對(duì)照組，每天不予任何特殊處置。(2)B組:MPTP模型組，從實(shí)驗(yàn)第4天起，每天經(jīng)腹腔注射25mg/Kg的MPTP，2h后給予等量生理鹽水腹腔注射1次，連續(xù)5天。(3)C組:SSTF預(yù)處理組，從實(shí)驗(yàn)第1天起，經(jīng)腹腔注射給予SSTF1次/天，連續(xù)3天，從第4天起，給予小鼠腹腔注射SSTF2h后腹腔注射MPTP1次，連續(xù)5天。(4)D組:SSTF治療組，從實(shí)驗(yàn)第4天起，經(jīng)腹腔注射給

3、予小鼠MPTP2h后腹腔注射SSTF1次/天，連續(xù)5天。二:小鼠行為學(xué)檢測(cè)。每日觀察小鼠行為學(xué)改變并按標(biāo)準(zhǔn)對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠震顫麻痹、懸掛實(shí)驗(yàn)、爬桿實(shí)驗(yàn)進(jìn)行記錄評(píng)分。三:實(shí)驗(yàn)標(biāo)本的制作。將麻醉后的小鼠行心臟灌注。清洗和固定后斷頭取腦，切取小鼠中腦組織制作石蠟切塊后保存?zhèn)溆?。?組織切片經(jīng)過(guò)烤片、脫蠟、水化及抗原修復(fù)后，按說(shuō)明書(shū)步驟行TH、Bcl-2、caspase-3和GFAP的免疫組化染色，倒置顯微鏡下觀察各個(gè)分組的細(xì)胞形態(tài)并進(jìn)行免疫陽(yáng)性細(xì)胞

4、計(jì)數(shù)。
　　結(jié)果:
　　一:B組(MPTP模型組)小鼠注射MPTP3-5min后均出現(xiàn)身體震顫、運(yùn)動(dòng)遲緩、弓背、步寬增加、步態(tài)不穩(wěn)、豎尾、豎毛等行為學(xué)改變。持續(xù)30分鐘左右癥狀開(kāi)始減輕，24小時(shí)后基本恢復(fù)正常。于B組對(duì)比，C組(SSTF預(yù)處理組)和D組(SSTF治療組)小鼠癥狀均有不同程度減輕，持續(xù)時(shí)間相對(duì)縮短。二:(1)震顫評(píng)分，懸掛能力和爬桿能力的測(cè)試結(jié)果均顯示，C組與D組能明顯改善小鼠運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)能力，與B組（MPTP模型

5、組）的差值均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。與A組（空白對(duì)照組）相比仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。C組與D組對(duì)比均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。隨著給藥次數(shù)的增加，每天的差值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。二:(1)TH免疫化學(xué)染色結(jié)果顯示，A組可見(jiàn)大量TH陽(yáng)性神經(jīng)元，軸突明顯，形態(tài)正常。B組TH陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)量明顯減少，C、D兩組TH陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)量較B組增加，較A組仍有差別，差值均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。C、D兩組對(duì)比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差

6、異(P＞0.05)，B組細(xì)胞形態(tài)改變明顯，胞體腫脹并輪廓不清，軸突減少或消失。(2) Bcl-2染色結(jié)果顯示，A組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)最多，棕黃色染色較深。B組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量明顯減少，C、D兩組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較B組明顯增多，與正常組相比仍有差別，差值均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，C、D兩組對(duì)比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。(3) caspase-3免疫化學(xué)染色結(jié)果顯示，B組的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)比A組顯著增多，差值具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。C組、D組陽(yáng)

7、性細(xì)胞數(shù)較B組明顯減少，差值具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，與A組相比陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。C、D兩組對(duì)比差值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。(4) GFAP免疫化學(xué)染色結(jié)果顯示，B、C、D組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均有不同程度增加，與A組對(duì)比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。B組GFAP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)最多，與C、D兩組的差值具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。C、D兩組對(duì)比差值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。B、C、D組細(xì)胞的形態(tài)均發(fā)生改