家蠶細胞系(BmN)凋亡過程中相關基因的轉錄特征研究.pdf

1、家蠶是重要的經(jīng)濟昆蟲,也是典型的模式昆蟲。以家蠶為對象研究細胞凋亡已經(jīng)有相關的報道,如家蠶的血液能起抗凋亡作用,蛻皮激素能誘發(fā)細胞凋亡等。但與線蟲、果蠅、人等模式生物相比,家蠶中的細胞凋亡代謝途徑的研究仍處于起步階段,以家蠶卵巢細胞系(BmN)為材料研究凋亡的報道很少。本研究在體外誘導因素(H2O2和病毒)作用下,通過形態(tài)學觀察,采用瓊脂糖凝膠電泳、實時熒光定量PCR(quantitativeReal-timePCR,QRT-PCR)等

2、技術手段對BmN細胞凋亡過程中的細胞形態(tài)、相關基因的表達水平差異進行了研究,并初步探討了凋亡過程中家蠶兩種乙酰膽堿酯酶基因(ace1和ace2)在凋亡過程中的作用,結果如下。
　　H2O2誘導家蠶BmN細胞凋亡。BmN細胞在0.100mol/LH2O2誘導下,3h即可在光學和熒光顯微鏡下觀察到凋亡特征,誘導24h后,通過瓊脂糖凝膠電泳可觀察到DNA呈明顯的梯狀條帶。QRT-PCR結果表明,家蠶端粒酶基因(Bombyxmori,te

3、lomerasegene,Bmtrt)在凋亡過程中表達量逐漸降低,家蠶凋亡相關基因Bmcaspase-5基因表達量逐漸升高,24h表達量為對照的41.942倍;家蠶P53基因(Bmp53)基因表達量先降低后逐漸升高,24h表達量為對照的1.592倍。結果表明經(jīng)H2O2誘導后,家蠶凋亡相關基因都出現(xiàn)了特征性表達,各基因和凋亡發(fā)生的關系還待進一步研究。
　　家蠶核型多角體病毒(Bombyx morinuclearpolyhedrosi

4、svirus,BmNPV)感染家蠶BmN細胞凋亡。BmNPV液30μL(1×108PFU/mL)感染家蠶BmN細胞24h,細胞變圓,邊緣光滑,48h后表現(xiàn)了明顯的細胞凋亡特征。QRT-PCR結果顯示,凋亡相關基因轉錄水平有明顯變化。Bmcaspase-1、Bmice-5基因48h表達量上調,分別為對照組表達量的15.195倍、6.245倍;Bmcaspase-5、Bmp53基因72h表達量明顯上調,分別為對照組表達量的22.911倍、4

5、.610倍;Bmtrt基因表達量下調。結果表明,經(jīng)BmNPV感染后的BmN細胞發(fā)生凋亡,為研究BmNPV感染機制提供新的參考信息。
　　家蠶乙酰膽堿酯酶基因在BmN細胞凋亡過程中的表達特征。研究了經(jīng)H2O2和BmNPV誘導后家蠶乙酰膽堿酯酶基因的表達特征,結果顯示,H2O2誘導的細胞凋亡過程中ace1基因表達量逐漸升高,而ace2表達量降低;BmNPV感染的細胞凋亡過程中,ace1和ace2表達量均有不同程度的上調,ace1上調表