Th17型細(xì)胞因子及MIF在同種移植急性排斥中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的: 同種器官移植可引起機(jī)體復(fù)雜的免疫應(yīng)答過程，在無免疫抑制劑的情況下，通常導(dǎo)致免疫排斥反應(yīng)和移植物的破壞。急性排斥反應(yīng)的早期診斷和及時治療是保證移植器官存活的關(guān)鍵。因此尋找和建立非侵襲性、靈敏、特異監(jiān)測指標(biāo)對于急性排斥的早期診斷和防治具有重要意義。 近年來研究表明，同種反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞在移植排斥反應(yīng)中起中心作用。一方面可通過直接途徑直接識別供者APC表面的MHC/抗原肽復(fù)合物，另一方面可通過間接途徑識別經(jīng)過受者APC

2、加工后表達(dá)在受者APC表面MHC/抗原肽復(fù)合物。同種移植物進(jìn)入機(jī)體后，移植物HLA抗原接觸并致敏受體免疫細(xì)胞，激活的免疫細(xì)胞通過IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IFN-γ、TNF等多種細(xì)胞因子識別移植物細(xì)胞，引起免疫排斥反應(yīng)。細(xì)胞因子常在排斥反應(yīng)早期就被釋放，因此可作為同種移植排斥反應(yīng)的早期診斷指標(biāo)。 Th17細(xì)胞是最近研究發(fā)現(xiàn)的一類不同于Th1和Th2的細(xì)胞亞群，此亞群細(xì)胞產(chǎn)生白細(xì)胞介素-17(IL-17)

3、、白細(xì)胞介素-6(IL-6)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)。其中關(guān)鍵因子IL-17與許多炎癥反應(yīng)和自身免疫性疾病的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)，動物實驗已經(jīng)證明，在移植排斥反應(yīng)中IL-17的表達(dá)明顯增加，而有關(guān)人類同種移植排斥過程中IL-17的動態(tài)表達(dá)狀況目前尚未見報道。IL-6是一種多功能前炎性細(xì)胞因子，在免疫細(xì)胞激活的早期即可釋放。既往研究發(fā)現(xiàn)，IL-17和IL-6參與調(diào)節(jié)多種腎臟疾病的發(fā)生發(fā)展過程，對于多種急慢性腎臟疾病的診斷和治療都具有

4、重要意義。因此監(jiān)測腎移植后患者血清IL-17和IL-6水平的變化，研究其與排斥反應(yīng)的相關(guān)性，探討是否可將其作為腎移植患者器官移植術(shù)后觀察排斥反應(yīng)的一項重要指標(biāo)，對于移植術(shù)后的療效觀察和預(yù)后判斷將具有重要價值。 近年來的研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞因子MIF(macrophage migration inhibition factor)參與自身免疫性關(guān)節(jié)炎的發(fā)生發(fā)展和腎小球腎炎的致病過程，參與遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)(DTH，DelayedTypeHyp

5、esensitivity)；腎移植病人尿中MIF水平與排斥程度正相關(guān)，提示MIF有可能作為監(jiān)測移植排斥的關(guān)鍵指標(biāo)。本實驗室的前期研究發(fā)現(xiàn)，抗MIF單抗體內(nèi)使用，可以明顯延長同種移植物的生存時間，因此檢測MIF的動態(tài)表達(dá)，對于利用標(biāo)記MIF進(jìn)行移植過程的檢測具有重要意義，但是尚不清楚在整個同種移植急性排斥過程中MIF的表達(dá)狀況。 鑒于Th17型細(xì)胞因子和MIF與移植排斥密切相關(guān)，有可能作為臨床監(jiān)測急性移植排斥的重要指標(biāo)，本文從臨床

6、角度，研究了腎移植患者手術(shù)前后血清IL-17和IL-6水平的變化以及在急性排斥反應(yīng)的水平和動態(tài)變化規(guī)律，觀察其與排斥反應(yīng)的關(guān)系，并探討其臨床意義。從基礎(chǔ)研究角度，建立小鼠同種移植急性排斥實驗?zāi)Ｐ停芯苛薓IF在移植排斥過程中的動態(tài)表達(dá)過程及MIF的放射性核素標(biāo)記方法。本課題旨在進(jìn)一步探討Th17型細(xì)胞因子和MIF在同種移植排斥中的意義和作用機(jī)制，為利用這些細(xì)胞因子監(jiān)測急性排斥反應(yīng)奠定實驗基礎(chǔ)。 方法與結(jié)果: 1、采用雙抗

7、體夾心ABC-ELISA法和放射免疫分析技術(shù)對30例臨床腎移植患者的血清IL-17和IL-6水平于手術(shù)前、手術(shù)后1、2、3、4周進(jìn)行動態(tài)監(jiān)測，并與健康對照組進(jìn)行對比研究。研究結(jié)果顯示，腎移植患者術(shù)前血清中的IL-17和IL-6水平與健康對照組相比無顯著性變化(p>0.05)。腎移植術(shù)1周后，患者血清IL-17水平顯著升高(p<0.05，vs術(shù)前)，并在第2、3周持續(xù)升高，術(shù)后第4周開始下降恢復(fù)至術(shù)前水平?；颊哐錓L-6水平也是在術(shù)后1

8、周顯著升高(p<0.05，vs術(shù)前)，持續(xù)至第4周，但是下降速度比IL-17緩慢。IL-17與IL-6的升高與同期血清肌酐與尿素氮濃度升高水平呈正相關(guān)關(guān)系。 2.建立小鼠同種移植急性排斥模型，在排斥的第1、7、14、21天分別取小鼠脾臟和移植皮片，RT-PCR檢測MIFmRNA的表達(dá)狀況，結(jié)果表明排斥高峰期MIF高表達(dá)。 3.應(yīng)用Iodogen法制備125I-rMIF，研究其穩(wěn)定性、特異性及在小鼠體內(nèi)的生物學(xué)分布規(guī)律。結(jié)

9、果表明，125I-rMIF的標(biāo)記率為96.5％，室溫下48h內(nèi)標(biāo)記化合物的生物學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，保持其免疫學(xué)活性。體內(nèi)生物學(xué)分布研究顯示125I-rMIF主要由肝臟和腎臟代謝，血液清除較快。 結(jié)論: 1.血清IL-17和IL-6水平可以反映腎移植受者的免疫狀態(tài)，監(jiān)測Th17型細(xì)胞因子變化可以早期發(fā)現(xiàn)移植后急性排斥反應(yīng)。血清IL-17可作為觀察急性排斥反應(yīng)的重要指標(biāo)。 2.同種移植排斥高峰期MIF高表達(dá)，MIF可以作為監(jiān)