雙歧桿菌對(duì)應(yīng)激大鼠腸道菌群及促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素的影響.pdf

1、研究背景和目的
　　 益生菌是人類(lèi)腸道的原籍菌,在維持宿主胃腸正常生理功能中發(fā)揮重要作用。Zairian M等研究證實(shí)益生菌能夠提高應(yīng)激大鼠腸道屏障功能、阻斷細(xì)菌移位。在種類(lèi)繁多的益生菌中,雙歧桿菌作為人類(lèi)腸道最早出現(xiàn)的益生菌極具研究?jī)r(jià)值。它不僅能夠調(diào)節(jié)腸道菌群失調(diào),而且能夠顯著改善腸易激綜合癥(IBS)和炎癥性腸病(IBD)患者的相關(guān)癥狀。益生菌所獨(dú)有的生物學(xué)特點(diǎn)和腸道黏膜免疫反應(yīng)的特異性,使腸道益生菌療法作為治療胃腸道疾病的

2、一種新療法,日益受到重視。思密達(dá)(蒙脫石散)是一種粘膜屏障劑,臨床上常用來(lái)治療腹瀉。
　　 盡管大量的數(shù)據(jù)顯示益生菌能夠調(diào)節(jié)腸道免疫、阻斷病原菌粘附提高粘膜屏障功能,但其在應(yīng)激所導(dǎo)致的胃腸道疾病中的治療作用研究較少。目前尚未見(jiàn)到長(zhǎng)雙歧桿菌對(duì)應(yīng)激大鼠腸道功能的調(diào)節(jié)作用的報(bào)道。在本實(shí)驗(yàn)中我們擬以避水試驗(yàn)?zāi)M環(huán)境和心理壓力,觀(guān)察在應(yīng)激條件下大鼠腸道生理生化指標(biāo)的變化,通過(guò)長(zhǎng)雙歧桿菌、思密達(dá)進(jìn)行干預(yù),觀(guān)察二者對(duì)應(yīng)激條件下大鼠腸道功能的調(diào)

3、節(jié)作用,以及二者有無(wú)協(xié)同治療作用,從而為臨床診斷和治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：
　　 雌性清潔級(jí)SD大鼠50只隨機(jī)分為5組:正常對(duì)照組、壓力試驗(yàn)組、雙歧桿菌干預(yù)組、思密達(dá)干預(yù)組、雙歧桿菌+思密達(dá)共同干預(yù)組。采用WAS(water avoidancestress)避水試驗(yàn)構(gòu)建大鼠應(yīng)激模型,應(yīng)激試驗(yàn)為7d。
　　 1.應(yīng)激試驗(yàn)結(jié)束后,以三糖為探針,留取大鼠24h尿液,衍生化毛細(xì)管氣相色譜法(CCGC)測(cè)定大鼠尿液

4、中兩種糖的濃度,以三氯蔗糖/甘露醇(S/M)評(píng)價(jià)大鼠腸道通透性；
　　 2.取大鼠新鮮糞便,用選擇性培養(yǎng)基平皿計(jì)數(shù)法檢測(cè)大鼠糞便菌群中幾種代表性菌種的數(shù)量；
　　 3.取腸系膜淋巴結(jié)(MLN)培養(yǎng)后測(cè)定細(xì)菌移位率；
　　 4.通過(guò)從屈氏韌帶下至回盲部全部小腸的病理切片,觀(guān)察腸粘膜的損傷情況；
　　 5.用酶聯(lián)免疫法(ELISA)測(cè)定大鼠血清中促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(CRF)和促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)

5、的含量。
　　 結(jié)果：
　　 1.與正常對(duì)照組相比,壓力試驗(yàn)組大鼠糞便中以大腸桿菌為代表的條件致病菌數(shù)量增多(7.078±0.229 vs7.347±0.277,P<0.05),24h尿液中甘露醇量升高(4.718％±0.399％ vs5.097％±0.453％,P<0.05),MLN細(xì)菌移位率升高(10％vs40％,P<0.05):血清CRF(267.0±32.3 vs300.8±34.3,Pg·mL-1,P<0.05

6、),ACTH濃度升高(5.68±0.799 vs6.79±0.651,Pg·mL-1,P<0.05)。
　　 2.與壓力試驗(yàn)組相比,雙歧杼菌干預(yù)組表現(xiàn)為大腸桿菌數(shù)量顯著下降(7.347±0.277 vs7.044±0.281,P<0.05),類(lèi)桿菌數(shù)量顯著下降(9.485±0.306 vs9.075±0.393,P<0.05),MLN細(xì)菌移位率下降(40％ vs10％,P<0.05),ACTH水平下降(6.79±0.651 vs

7、5.92±0.477,Pg·mL-1,P<0.05)；思密達(dá)組大腸桿菌數(shù)量顯著下降(7.347±0.277 vs7.054±0.302,P<0.05),MLN細(xì)菌移位率顯著下降(40％ vs20％,P<0.05)。
　　 3.長(zhǎng)雙歧桿菌與思密達(dá)共同干預(yù)后,與長(zhǎng)雙歧桿菌、思密達(dá)單獨(dú)干預(yù)組相比在腸道菌群及血清CRF的調(diào)節(jié)上無(wú)顯著差異。
　　 結(jié)論：
　　 1.在慢性應(yīng)激條件下,大鼠腸道出現(xiàn)了以條件致病菌增多為特征的腸

8、道菌群紊亂,MLN細(xì)菌移位率升高,腸道通透性升高,血清CRF升高,說(shuō)明大鼠腸道屏障功能受損,神經(jīng)內(nèi)分泌處于應(yīng)激狀態(tài)。
　　 2.長(zhǎng)雙歧桿菌和思密達(dá)干預(yù)后,條件致病菌數(shù)量顯著下降,血清CRF或ACTH均有顯著下降,MLN細(xì)菌移位率顯著下降,說(shuō)明長(zhǎng)雙歧桿菌與思密達(dá)均能夠部分緩解慢性應(yīng)激所導(dǎo)致的腸道功能紊亂。
　　 3.長(zhǎng)雙歧桿菌和思密達(dá)二者在治療應(yīng)激所導(dǎo)致的腸道功能紊亂中無(wú)協(xié)同作用。
　　 4.CCGC測(cè)定應(yīng)激大鼠腸