肉牛瘤胃纖維分解菌RealTime PCR定量方法的建立與應用.pdf

1、本研究針對瘤胃中復雜微生物，在前人經(jīng)驗基礎(chǔ)上建立了一整套提取瘤胃微生物總DNA方法。通過多種方法的比較及優(yōu)化，證明反復凍融法與珠磨儀法經(jīng)過改進后提取瘤胃微生物總DNA片段基本在20kb左右，提取效率穩(wěn)定，并通過真細菌、古細菌和真菌16S/18S rDNA的通用引物從所提取的瘤胃微生物總DNA中擴增出目的片段。表明這兩種方法可以滿足后續(xù)實驗的要求。而對于超聲波法與液氮研磨法提取的瘤胃微生物總DNA濃度偏低，只適應于對瘤胃微生物的簡單分析研

2、究。 本研究選擇瘤胃微生物中具有體表性的五種纖維分解菌脂解厭氧弧桿菌(Anaerovibrio lipolytica)、產(chǎn)琥珀酸絲狀桿菌(Fibrobacter succinogenes)、黃色瘤胃球菌(Ruminococcus flavefaciens)、溶纖維丁酸弧菌(Butyrivibrio fibrisolven)、白色瘤胃球菌(Ruminococcus albus)為例，根據(jù)其16S rDNA的保守區(qū)的基因序列設(shè)計引物

3、，用Real Time PCR技術(shù)，建立了對瘤胃微生物相對定量的分子生物學方法。 同時，應用這些方法研究了日糧中添加豆油和胡麻油后對肉牛瘤胃微生物數(shù)量的影響。日糧中添加豆油和胡麻油后抑制了纖維分解菌的產(chǎn)生，其中在添加豆油組中，A. lipolyticao、F.sSuccinogene、R．flavefaciens、B.fibrisolven和R.albus采食后分別減少了54﹪，42﹪， 52﹪， 65﹪和 17﹪。在添加胡麻油