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文檔簡介
1、目的:本文探討應(yīng)用耐藥逆轉(zhuǎn)劑維拉帕米后,肺腺癌細(xì)胞株A549及其耐藥細(xì)胞株A549/T細(xì)胞間縫隙連接通訊和細(xì)胞內(nèi)鈣濃度的變化,并探討所產(chǎn)生的機(jī)制。 方法:先選擇有效的耐藥逆轉(zhuǎn)劑--維拉帕米,通過MTT法明確其能逆轉(zhuǎn)A549/T對紫杉醇的耐藥性及逆轉(zhuǎn)能力。接著通過流式細(xì)胞儀測定在應(yīng)用維拉帕米不同濃度和不同時(shí)間后,兩種細(xì)胞株上MRP1和CX43的表達(dá)變化的情況。最后用激光共集焦顯微鏡測定應(yīng)用維拉帕米不同濃度和不同時(shí)間后,兩種細(xì)胞株細(xì)
2、胞內(nèi)鈣離子濃度變化以及檢測兩者GJIC功能。 結(jié)果:第一部分:A549/T對紫杉醇的耐藥倍數(shù)是A549的50-80倍,而加用不同濃度的維拉帕米后均可見其耐藥倍數(shù)明顯下降,給予維拉帕米10-20ug/ml之間耐藥倍數(shù)基本上維持在敏感株2倍左右。 第二部分:A549/T細(xì)胞鏌上MRP1水平明顯高于A549細(xì)胞(65.22±1.74%Vs1.69±0.32%,P<0.01),維拉帕米的應(yīng)用可以明顯減小耐藥株MRP1水平且與時(shí)間
3、和濃度相關(guān);A549/T的連接蛋白CX43水平也明顯低于敏感(4.11±0.41%vs12.49±0.37%,P<0.05),給予維拉帕米后耐藥株上CX43水平也隨濃度和時(shí)間延長而升高(耐藥株加V20ug/ml×72h12.49±0.37),相關(guān)性分析表明這兩項(xiàng)指標(biāo)呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)。 第三部分:敏感細(xì)胞內(nèi)鈣含量高于耐藥細(xì)胞株(25.90±2.06vs13.91±1.91,P<0.01)。應(yīng)用維拉帕米后,兩株細(xì)胞內(nèi)的鈣濃度均隨給藥時(shí)間的
4、延長和維拉帕米濃度的增加而增加,但在10-20ug/ml濃度下兩種細(xì)胞株鈣的變化均無顯著差異。兩組細(xì)胞株GJIC的功能在給藥前后未均恢復(fù)。相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)在耐藥細(xì)胞株中鈣的變化與MRP1呈負(fù)相關(guān)(r=-0.768,P=0.044),耐藥細(xì)胞株中鈣的變化與CX43呈正相關(guān)(r=0.916,P=0.004)。 結(jié)論:肺腺癌A549/T對紫杉醇的耐藥性的機(jī)制之一可能是通過MRP1外排紫杉醇,維拉帕米能夠隨濃度的增加明確逆轉(zhuǎn)A549/T對
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