分子分型方法在結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群分離株中的研究和應(yīng)用.pdf

1、目的： 1.建立快速鑒定結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群(MTBC)菌種的方法。 2.建立Spoligotyping和VNTR兩種MTBC分離株基因分型方法，評(píng)價(jià)其應(yīng)用價(jià)值及在我國(guó)應(yīng)用的可行性。 方法： 1.將7對(duì)MTBC各菌種特異性引物(Mtbc1-7)進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)，通過(guò)對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物的不同帶型進(jìn)行分析，對(duì)已知標(biāo)準(zhǔn)株和96株臨床分離株進(jìn)行菌種鑒定。 2.將被鑒定的結(jié)核分枝桿菌菌株進(jìn)行Spoligot

2、yping和VNTR兩種分型，其結(jié)果進(jìn)行比較。 結(jié)果： 1.用3株MTBC標(biāo)準(zhǔn)株，9株非分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)株以及27株非結(jié)核分枝桿菌(NTM)標(biāo)準(zhǔn)株對(duì)7對(duì)MTBC各菌種特異性引物進(jìn)行特異性鑒定，結(jié)果證明引物Mtbc1能鑒定出分枝桿菌和非分枝桿菌；引物Mtbc2能鑒定出NTM和MTBC；引物Mtbc3能鑒定出微小分枝桿菌；引物Mtbc4能從MTBC中識(shí)別出牛分枝桿菌和卡介苗；引物Mtbc5能鑒定出非洲分枝桿菌Ⅱ型和結(jié)核分枝桿菌；

3、引物Mtbc6和引物Mtbc4結(jié)合能鑒定出卡介苗；引物Mtbc7和引物Mtbc5聯(lián)合能鑒定出M.canettii分枝桿菌。96株臨床分離株經(jīng)7對(duì)引物擴(kuò)增，擴(kuò)增結(jié)果顯示NTM20株，牛分枝桿菌1株，卡介苗1株，M.canettii分枝桿菌3株，微小分枝桿菌3株，非洲分枝桿菌1型3株，M.caprae分枝桿菌1株，結(jié)核分枝桿菌或非洲分枝桿菌Ⅱ型64株。 2.用Spoligotyping方法對(duì)59株結(jié)核分枝桿菌菌株進(jìn)行基因分型，得到1

4、1種基因型，其中49株屬北京基因型菌株，而用VNTR分型方法可將這些菌株分為53種基因型。49株北京基因型菌株可以分為43種不同的VNTR基因型。10個(gè)VNTR位點(diǎn)的多態(tài)性分析表明各位點(diǎn)有較大的區(qū)別，其中8個(gè)位點(diǎn)顯示了較高的多念性，2個(gè)位點(diǎn)顯示了中等程度的多態(tài)性。 結(jié)論： 1.應(yīng)用PCR技術(shù)鑒定MTBC菌種結(jié)果準(zhǔn)確可靠，且具有簡(jiǎn)便和快速等優(yōu)點(diǎn)，有較大的分子流行病學(xué)應(yīng)用價(jià)值。 2.Spoligotyping分型法只