布萊凱特黑牛CoQ10合成相關(guān)酶COQ2基因cDNA克隆及其多態(tài)性分析.pdf

1、CloningofCOQ2GenecDNAandAnalyzingofItsPolymorphismsinBlackCattleThesissubmittedtoQngdaoA97彳culturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeof—MasterofAgronomyNiuZhaoshan(CollegeofAnimalScienceandVerterinaryMed

2、icine)Supervisor：ProfDongYajuanBaiXuejinQingdaoChinaJune，2013布萊凱特黑牛CoQ。o合成相關(guān)酶C002基因eDNA克隆及其多態(tài)性分析摘要c002基因是真核生物中對(duì)羥基苯甲酸聚異戊二烯轉(zhuǎn)移酶(PPT)的編碼基因，該酶是CoQ，。生物合成過(guò)程的主要限速酶，影響著體內(nèi)CoQ，。的合成和機(jī)體表型性狀。根據(jù)已公布的普通牛cooe基因序列和cDllh序列，對(duì)c002基因的7個(gè)外顯子區(qū)域設(shè)計(jì)

3、引物，PCR產(chǎn)物克隆測(cè)序后，比對(duì)、拼接得到布萊凱特黑牛c002基因的eDNA序列；并采用PCRSSCP分析與克隆測(cè)序相結(jié)合的方法對(duì)c002基因外顯子1、3和6進(jìn)行多態(tài)性研究。結(jié)果表明：1布萊凱特黑牛c002基因cDNA序列，總長(zhǎng)1546bp，由7個(gè)長(zhǎng)分別為298bp、167bp、122bp、86bp、134bp、189bp和550bp的外顯子組成，第46bp至第1161bp間為其氨基酸編碼序列。與普通牛相比，其氨基酸序列第324位由N突

4、變?yōu)镠。2其外顯子1存在三種基因型，其中AB基因型為優(yōu)勢(shì)基因型，A等位基因和B等位基因頻率相差不大，其PIC值屬中度多態(tài)。該多態(tài)位點(diǎn)為存在于外顯子1第55bp處G—T的突變，使編碼的氨基酸由A突變?yōu)镾，進(jìn)而使突變后蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)減少了1個(gè)o【一螺旋和1個(gè)p一折疊，增加了1個(gè)p一轉(zhuǎn)角。3其外顯子3中也存在一個(gè)多態(tài)位點(diǎn)，為第102bp處A—T的突變，屬同義突變。該突變也產(chǎn)生了三種基因型，其中cD基因型為優(yōu)勢(shì)基因型；D等位基因?yàn)閮?yōu)勢(shì)等位基因；

5、該多態(tài)位點(diǎn)PIC值也屬中度多態(tài)。4其外顯子6僅呈現(xiàn)一種基因型，該片段無(wú)多態(tài)性。5外顯子1多態(tài)性與布萊凱特黑牛的背膘厚有一定的相關(guān)性，而與其眼肌面積無(wú)關(guān)，且兩相關(guān)性分析均呈現(xiàn)出AB和BB基因型個(gè)體平均值較高。本研究成功克隆、拼接了布菜凱特黑牛cooe基因cDNA序列；在外顯子1和3各發(fā)現(xiàn)1個(gè)多態(tài)位點(diǎn)，并對(duì)外顯子1與布萊凱特黑牛的眼肌面積和背膘厚進(jìn)行了相關(guān)性分析，這為研究C002基因多態(tài)性與CoQ，。體內(nèi)合成情況及其他性狀相關(guān)性奠定了理論數(shù)