銀杏葉提取物聯(lián)合燈盞細(xì)辛對兔視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:本課題是在慢性持續(xù)性高眼壓動物模型建立的基礎(chǔ)上,觀察銀杏葉提取物聯(lián)合燈盞細(xì)辛對新西蘭白兔慢性持續(xù)性高眼壓模型視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的保護(hù)作用,從而探討其保護(hù)機(jī)制。
　　研究方法:對20只新西蘭白兔進(jìn)行眼壓測量,排除眼壓異常。隨機(jī)抽取4只為正常對照組,其余新西蘭白兔雙眼前房內(nèi)注射糜蛋白酶建立慢性高眼壓模型,造模后測量24h及72h的眼壓,24h眼壓>30mmHg,72h眼壓>26.6mmHg為造模成功。造模成功的家兔16只隨機(jī)分為4

2、組,每組8只眼。造模后72h開始治療,共治療4w。治療方法如下:銀杏葉A組:銀杏葉提取物150mg/Kg灌胃,每日1次;燈盞細(xì)辛B組:燈盞細(xì)辛150mg/Kg灌胃,每日1次;聯(lián)合用藥C組:銀杏葉提取物150mg/Kg聯(lián)合燈盞細(xì)辛150mg/Kg灌胃,每日1次;模型對照D組:不予任何治療。各組兔于開始治療第29d經(jīng)耳緣靜脈注射空氣栓塞致死,立即摘取眼球,在眼球赤道部用5mL注射器抽取部分眼內(nèi)組織后置換等量的甲醛溶液,置入甲醛溶液固定24h

3、,石蠟包埋,切片,HE染色,制成切片后用Olympus光學(xué)顯微鏡觀察視網(wǎng)膜各層病理改變;計算各層RGCs胞核內(nèi)AgNOR染色后銀染顆粒的數(shù)目,分析細(xì)胞的活性與功能情況;免疫組化方法檢測新西蘭白兔視網(wǎng)膜caspase-3蛋白表達(dá)情況;TUNEL法檢測視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡細(xì)胞,及正常的視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。
　　結(jié)果:1.α-糜蛋白酶(0.2ml)(2667.2μkat)注入新西蘭白兔眼后房,造成實(shí)驗(yàn)性慢性高眼壓至少1m,術(shù)后眼壓維持在30mmH

4、g以上。高眼壓下視網(wǎng)膜中內(nèi)界膜至節(jié)細(xì)胞層外界的厚度明顯變薄,較正常對照眼差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　2.視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層中TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)從高到低依次為模型對照組、單純用藥組、聯(lián)合用藥組、正常組,四組間凋亡指數(shù)兩兩比較差異都具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　3.正常組和聯(lián)合用藥組 RGCs細(xì)胞核內(nèi)銀染顆粒數(shù)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P﹥0.05);模型對照和單純用藥組RGCs細(xì)胞核內(nèi)銀染顆粒明顯減少,與正常

5、組和聯(lián)合用藥組相比,差異都具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);用藥組較模型對照組多,差異也具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　4.各組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層Caspase-3蛋白陽性表達(dá)較正常組明顯增強(qiáng)。其中模型對照組陽性細(xì)胞數(shù)最多,聯(lián)合用藥組也明顯低于用藥組。四組間兩兩比較差異都具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論:1.α-糜蛋白酶(0.2ml)(2667.2μkat)注入新西蘭白兔眼后房,可獲得持續(xù)、穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)性慢性高眼