紅斑狼瘡間質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)異常及臍帶MSCs移植治療狼瘡鼠的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 1.探討系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）患者骨髓間質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）的超微結(jié)構(gòu)及細(xì)胞骨架的形態(tài)學(xué)特征及探討臍帶間質(zhì)干細(xì)胞（UC-MSCs）對(duì)MRL/lpr狼瘡鼠的治療作用和可能機(jī)制。 方法： 體外培養(yǎng)SLE患者的MSCs后，透射電子顯微鏡（TEM）、激光共聚焦顯微鏡（LCM）觀察超微結(jié)構(gòu)及肌動(dòng)蛋白、紐蛋白的表達(dá)；24只18周齡雌性MRL/lpr小鼠，分為3組：對(duì)照組（G1）、UC-MSCs1次治療組（G2）、U

2、C-MSCs3次治療組（G3）。觀察體重，考馬斯亮藍(lán)法檢測(cè)24h尿蛋白含量，酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)抗雙鏈DNA（ds-DNA）抗體水平、血清和尿液?jiǎn)魏思?xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）水平，觀察腎臟、肺、頜下腺病理改變蛋白印跡法檢測(cè)腎臟MCP-1、高遷移率族蛋白B1（HMGB-1）、基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）和脾臟Foxp3蛋白水平的表達(dá)，實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)腎臟MCP-1、HMGB-1、MMP-2 mRNA和脾臟Poxp3基

3、因表達(dá)，免疫組化檢測(cè)MCP-1以及HMGB-1、MMP-2在腎臟的表達(dá)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)脾臟、淋巴結(jié)中CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞百分率，TUNEL法檢測(cè)腎臟細(xì)胞的凋亡。 結(jié)果： SLE MSCs透射電子顯微鏡下多數(shù)細(xì)胞內(nèi)呈衰老征象，可見(jiàn)大量自噬體；細(xì)胞邊緣應(yīng)力纖維增多，排列紊亂，組成粗大的強(qiáng)熒光團(tuán)，核周圍應(yīng)力纖維減少；紐蛋白在細(xì)胞邊緣排列紊亂，細(xì)胞核周圍增多；UC-MSCs移植后顯著降低MRL/lpr狼瘡鼠24

4、h尿蛋白定量、血肌酐，改善腎臟、肺、頜下腺病理。G1組抗ds-DNA抗體滴度較G3組顯著升高。HMGB-1mRNA表達(dá)量與血清抗ds-DNA抗體水平（r=0.469，P=0.021）及24h尿蛋白定量（r=0.766，P=0.000）相關(guān)。UC-MSCs移植能顯著降低MCP-1、HMGB-1、MMP-2在MRL/lpr狼瘡鼠腎臟的表達(dá)，上調(diào)脾臟CD4+Foxp3+T淋巴細(xì)胞的表達(dá)。UC-MSCs移植后系膜區(qū)細(xì)胞、腎小管間質(zhì)細(xì)胞、腎血管周