依布硒啉對內(nèi)毒素性急性肺損傷保護(hù)作用及相關(guān)機制.pdf

1、研究背景及目的:
　　 急性肺損傷(Aucte lung injury, ALI)/急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distress syndrome，ARDS)是常見的臨床危重癥，是由心源性以外的各種肺內(nèi)外致病因素（嚴(yán)重感染、休克、創(chuàng)傷、燒傷和吸入有害氣體等）造成彌漫性的肺間質(zhì)、肺泡水腫和肺部急性炎癥。臨床表現(xiàn)為呼吸窘迫和頑固性的低氧血癥等。ALI/ARDS進(jìn)展迅速，可轉(zhuǎn)變成為多臟器功能衰竭，預(yù)后差，病

2、死率高。ALI/ARDS確切發(fā)病機制尚不完全清楚，可能與炎性介質(zhì)、氧化應(yīng)激產(chǎn)物、肺泡上皮和血管內(nèi)皮損傷、凋亡等多種因素有關(guān)。大量炎性介質(zhì)和細(xì)胞因子導(dǎo)致肺微血管通透性增加、肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞受損，表面活性物質(zhì)生成減少，加上水腫液稀釋作用，表面活性物質(zhì)含量更低，肺表面張力增大、肺的順應(yīng)性降低，肺泡塌陷和有效通氣面積減少，通氣/血流比例嚴(yán)重失調(diào)，形成進(jìn)行性的低氧血癥。目前研究發(fā)現(xiàn)，抗炎、抗氧化是有力的保護(hù)措施，對ALI/ARDS患者早期給予抗炎

3、等綜合治療，有助于炎癥的消退和肺功能的改善。因此，在ALI/ARDS的治療策略方面，及時有效的抗炎、抗氧化治療，對提高肺組織的氧合能力，糾正低氧血癥、改善肺功能等有重要意義。
　　 轉(zhuǎn)錄因子NF-E2相關(guān)因子(NF-E2-related factor2，Nrf2)是細(xì)胞抗氧化反應(yīng)的中樞調(diào)節(jié)者，是細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)中的關(guān)鍵因子，Nrf2通過與抗氧化反應(yīng)元件（antioxidant response element，ARE）相互作用，

4、在抗炎、抗氧化機制中具有重要作用。多種刺激或藥物能誘導(dǎo)Nrf2過表達(dá)，Nrf2/ARE信號通路激活后，調(diào)節(jié)抗氧化蛋白和Ⅱ相解毒酶表達(dá)，主要有血紅素加氧酶(HO-1)、硫氧還蛋白（Trx）、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)、環(huán)氧化物水解酶(EH)、磺基轉(zhuǎn)移酶（SULT）、乙醛基轉(zhuǎn)移酶、乙醛脫氫酶(ALDH)、醌氧化還原酶(NQO1)、葡糖醛酸轉(zhuǎn)移酶(UGT)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)、谷胱甘肽合成酶等，它

5、們能清除體內(nèi)多種致癌物質(zhì)或其他毒性及氧化性物質(zhì)，減少對DNA及生物功能蛋白破壞，以維持機體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。
　　 NF-κB屬于Rel蛋白家族，是一種普遍存在的誘導(dǎo)型核轉(zhuǎn)錄因子，細(xì)胞受到外界刺激后，NF-κB從胞質(zhì)進(jìn)人細(xì)胞核，與DNA鏈上特異的部位結(jié)合，調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄。NF-κB調(diào)控多種細(xì)胞因子、黏附分子和炎性介質(zhì)，如TNF-α、IL-1β、IL-6、iNOS、COX-2、ICAM-1等。NF-κB過度激活可引起炎癥介質(zhì)大量合成、釋

6、放，導(dǎo)致炎癥瀑布效應(yīng)，加快ALI及ARDS的進(jìn)程。促炎癥因子(TNF-α，IL-1β)是機體應(yīng)激后產(chǎn)生最早、并起到核心作用的炎癥介質(zhì)，通過增強炎癥細(xì)胞活性，產(chǎn)生活性氧，血小板活化因子等，引起炎性損傷;炎癥介質(zhì)過度釋放及氧化應(yīng)激產(chǎn)物增多，與ALI/ARDS發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。
　　 ICAM-1是一種免疫球蛋白超家族細(xì)胞間粘附分子，表達(dá)于內(nèi)皮細(xì)胞、淋巴細(xì)胞，介導(dǎo)單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞及激活內(nèi)皮細(xì)胞。ICAM-1參與免疫、炎

7、癥及腫瘤轉(zhuǎn)移等一系列重要生理和病理過程。研究發(fā)現(xiàn)ICAM-1介導(dǎo)的白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞粘附是白細(xì)胞聚集、活化和釋放炎性介質(zhì)的關(guān)鍵，加重炎癥級聯(lián)反應(yīng)，在ALI中起著重要作用。
　　 依布硒林(Ebs)，化學(xué)名為2-苯基-1,2-苯并異硒唑-3(2H)-酮，是一類小分子有機硒化合物。在對有機硒化合物研究中，最初發(fā)現(xiàn)它們具有毒性小且穩(wěn)定的特點，隨后在對其活性的測試中發(fā)現(xiàn)，此類物質(zhì)還具有增強組織抗氧化能力，抗腫瘤及抗微生物等活性，引起了研究

8、人員的極大興趣。Ebs是目前公認(rèn)具有模擬谷胱甘肽過氧化物酶(GPX)作用最好的藥物之一，Ebs在抗炎、抗腫瘤、抗動脈粥樣硬化，治療心肌和腦缺血以及免疫調(diào)節(jié)等方面有顯著的效果，特別是在多種因素誘導(dǎo)的肺損傷模型中，Ebs均顯示出強大的保護(hù)作用。多種疾病模型中，Ebs能夠誘導(dǎo)Nrf2及其下游基因HO-1和Trx表達(dá)，但未見Ebs對靜脈注射LPS誘導(dǎo)的內(nèi)毒素性急性肺損傷的研究報道。
　　 本研究通過觀察Nrf2在內(nèi)毒素性肺損傷中動態(tài)表達(dá)

9、，了解其在ALI中的作用。探討Ebs是否可以通過調(diào)控Nrf2，進(jìn)而誘導(dǎo)下游抗炎、抗氧化基因表達(dá)，發(fā)揮保護(hù)作用，為臨床防治急性肺損傷提供一個新的思路和方法。
　　 第一章內(nèi)毒素性急性肺損傷模型建立及Nrf2的表達(dá)
　　 目的:
　　 建立內(nèi)毒素性急性肺損傷模型，觀察Nrf2、炎癥因子及氧化應(yīng)激產(chǎn)物的動態(tài)表達(dá)，探討機體對內(nèi)毒素刺激的應(yīng)答機制。
　　 方法:
　　 將36只體重180-220g的SD雄性

10、大鼠隨機分為兩組:正常對照組(n=18)和模型組(n=18)，模型組尾靜脈注射LPS(5mg/kg)，而正常對照組尾靜脈注射相應(yīng)的生理鹽水。分別于造模后6h、24h、72h分批放血處死動物后，各組各時間點均取6只動物，收集血清、支氣管肺泡灌洗液(BALF)和肺組織。觀察和比較各組各個時間點動脈血氣、肺干濕比、BALF中蛋白含量、肺組織病理，血中炎癥因子(TNF-α、IL-1β)、肺組織中氧化應(yīng)激產(chǎn)物(MDA、SOD、MPO)及抗氧化轉(zhuǎn)錄

11、因子Nrf2表達(dá)。采用析因設(shè)計方差分析進(jìn)行比較后，再進(jìn)行多重比較。取P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.各組大鼠PaO2變化:時間和組別不存在交互效應(yīng)(F=2.253，P=0.123)，C組三個時間點，PaO2介于(91.10±3.55) mmHg至(93.27±3.45)mmHg，三組比較，統(tǒng)計學(xué)無差異(F=0.756，P=0.487)，而LPS組三個時間點有增高趨勢，介于(72.60±6.20)

12、 mmHg至(78.93±5.03) mmHg，但差異仍無統(tǒng)計學(xué)意義（F=1.702，P=0.218）。LPS組從T1時開始，大鼠PaO2均較對照組同一時間點的數(shù)值低，且組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(T1、T2時P均0.000，T3時P=0.001)。
　　 2.各組大鼠PaCO2變化:時間和組別不存在交互效應(yīng)(F=2.566，P=0.094)，C組三個時間點，PaCO2介于(45.82±3.21) mmHg至(46.58±4.05)

13、mmHg，各時間點比較，未見統(tǒng)計學(xué)差異(F=0.358，P=0.705)，而LPS組有降低趨勢，介于(57.67±2.55) mmHg和(53.37±3.80) mmHg之間，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(F=3.988，P=0.051)。LPS組從T1時開始，大鼠PaCO2均較對照組同一時間點的數(shù)值要高，且組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(T1時P=0.000、T2時P=0.002，T3時P=0.024)。
　　 3.各組大鼠肺濕重/干重比(W/D)

14、:時間和組別不存在交互效應(yīng)(F=0.819，P=0.451)，C組各時間介于(3.88±0.17)至(4.11±0.27)。各個時間點比較，未見統(tǒng)計學(xué)差異（F=1.153，P=0.252），而LPS組介于(5.35±0.26)至(5.11±0.34)，有降低趨勢，但差異仍無統(tǒng)計學(xué)意義（F=1.014，P=0.383）。LPS組從T1時開始，大鼠W/D均較對照組同一時間點的數(shù)值要高，且組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(T1、T2、T3時P均0.000

15、)。
　　 4.各組大鼠BALF中蛋白:時間和組別不存在交互效應(yīng)（F=2.573，P=0.094）。C組各時間點介于(186.19±23.86) mg/L至(192.77±28.58) mg/L，各個時間點比較，未見統(tǒng)計學(xué)差異(F=0.101，P=0.906)，而LPS組介于(378.43±32.75)mg/L至(321.97±31.44) mg/L，有降低趨勢，T3明顯低于T1，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=4.503，P=0.031

16、）。LPS組從T1時開始，大鼠BALF中蛋白均較對照組同一時間點的數(shù)值要高，且組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(T1、T2、T3時P均0.000)。
　　 5.各組大鼠肺組織病理學(xué)改變:光鏡下可見各組三個時間點肺組織病理改變較小，C組肺組織結(jié)構(gòu)清晰，肺泡腔無炎性細(xì)胞浸潤，肺泡壁薄，間質(zhì)血管無擴張，支氣管粘膜上皮完整。LPS組肺泡結(jié)構(gòu)受到廣泛破壞，肺組織水腫及肺間質(zhì)明顯的增寬，肺泡腔內(nèi)有漿液性滲出，可見大量紅細(xì)胞以及中性粒細(xì)胞。
　　

17、 6.各組大鼠肺組織MDA表達(dá):時間和組別不存在交互效應(yīng)（F=2.755，P=0.080）。C組各時間點MDA介于(7.01±2.52) nmol/mg至(7.44±2.10) nmol/mg;各個時間點比較，未見統(tǒng)計學(xué)差異（F=0.048，P=0.954），而LPS組介于(26.47±4.80) nmol/mg至(19.36±3.68)nmol/mg，有降低趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(F=3.112，P=0.076)。LPS組從T1時開

18、始，大鼠肺組織MDA均較對照組同一時間點的數(shù)值要高，且組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(T1、T3時P均0.000，T2時P=0.003)。
　　 7.各組大鼠肺組織SOD活性:時間和組別不存在交互效應(yīng)（F=2.864，P=0.073）。C組各時間點肺組織SOD活性介于(193.07±17.39) U/mg至(203.60±16.89)U/mg，各時間點比較，未見統(tǒng)計學(xué)差異（F=0.657，P=0.533）。而LPS組介于(93.08±12

19、.53) U/mg至(115.70±13.64) U/mg，隨時間推移逐漸升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=4.211，P=0.037)。LPS組從T1時開始，大鼠肺組織SOD均較對照組同一時間點的數(shù)值低，且組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(T1、T2、T3時P均0.000)。
　　 8.各組大鼠肺組織MPO活性:時間和組別不存在交互效應(yīng)(F=1.713，P=0.198)。C組各時間點肺組織MPO介于(2.17±0.52) U/g至(2.02±0

20、.78) U/g;各個時間點之間差異未見未見統(tǒng)計學(xué)差異（F=0.091，P=0.914）。LPS組介于(7.78±1.59) U/g至(6.30±1.03) U/g，有降低趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(F=1.686，P=0.221)。LPS組從T1時開始，大鼠肺組織MPO均較對照組同一時間點的數(shù)值高，且組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(T1、T2、T3時P均0.000)。
　　 9.各組大鼠血清TNF-α表達(dá):時間和組別存在交互效應(yīng)(F=4.

21、909，P=0.015)。C組各時間點血清TNF-α介于(93.43±20.69) pg/ml至(90.53±19.99) pg/ml，各個時間點比較，未見統(tǒng)計學(xué)差異（F=0.031，P=0.970），而LPS組介于(379.05±41.85) pg/ml至(298.95±39.52) pg/ml，有降低趨勢，T3明顯低于T1，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=6.554，P=0.010）。LPS組從T1時開始，大鼠血清中TNF-α均較對照組同一時

22、間點的數(shù)值高，且組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(T1、T2、T3時P均0.000)。
　　 10.各組大鼠血清IL-1β表達(dá):時間和組別不存在交互效應(yīng)（F=3.284，P=0.052）。C組各時間點血清IL-1β介于(81.76±20.43) pg/ml至(74.23±20.10) pg/ml，未見統(tǒng)計學(xué)差異(F=0.239，P=0.790)，而LPS組介于(344.89±46.94) pg/ml至(270.38±41.71)pg/ml，

23、有降低趨勢，T3明顯低于T1，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=4.046，P=0.041）。LPS組從T1時開始，大鼠血清中IL-1β均較對照組同一時間點的數(shù)值高，且組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(T1、T2、T3時P均0.000)。
　　 11.各組大鼠肺組織Nrf2相對表達(dá)量比較:時間和組別不存在交互效應(yīng)(F=2.682，P=0.109)。C組各時間點未見統(tǒng)計學(xué)差異(F=0.273，P=0.770)，而LPS組T2時達(dá)到高峰，但三個時間點差異無

24、統(tǒng)計學(xué)意義(F=2.114，P=0.202)。LPS組從T1時開始，大鼠肺組織Nrf2均較對照組同一時間點的數(shù)值高，且組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(T1時P=0.013，T2時P=0.011、T3時P=0.025)。
　　 結(jié)論:
　　 5mg/kg的LPS尾靜脈注射能夠?qū)е麓笫?h、24h、72h三個時間點氧合障礙、肺部間質(zhì)水腫、氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)增加，以6h時最明顯;并且能激活體內(nèi)的抗氧化系統(tǒng)，使Nrf2表達(dá)增多，但隨時間變

25、化不明顯?？梢姳狙芯坎捎?mg/kg的LPS能夠成功制備ALI大鼠模型。該研究可為以后研究提供ALI動物模型。
　　 第二章依布硒啉對內(nèi)毒素性急性肺損傷保護(hù)作用及機制
　　 目的:
　　 通過建立內(nèi)毒素性急性肺損傷模型，觀察依布硒啉對內(nèi)毒素性急性肺損傷炎癥因子和氧化應(yīng)激影響，通過研究抗氧化轉(zhuǎn)錄因子Nrf2及其下游的抗氧化基因HO-1和Trx-1，以及NF-κB、ICAM-1等，闡明依布硒啉對內(nèi)毒素性肺損傷保護(hù)作用

26、分子機制。
　　 方法:
　　 將48只體重180-220g的SD雄性大鼠隨機分為6組（每組8只）:正常對照組（C組）、模型組(LPS)、依布硒啉低劑量組（EbsL組）、中劑量組(EbsM組)、高劑量組（EbsH組）和地塞米松組（DEX組）。LPS組:尾靜脈注射LPS5mg/kg+腹腔注射溶劑;EbsL組:尾靜脈注射LPS5mg/kg+腹腔注射依布硒啉7.5mg/kg; EbsM組:尾靜脈注射LPS5mg/kg+腹腔注射

27、依布硒啉15mg/kg; EbsH組:尾靜脈注射LPS5mg/kg+腹腔注射依布硒啉30mg/kg; DEX組:尾靜脈注射LPS5mg/kg+腹腔注射地塞米松5mg/kg;C組:尾靜脈注射等量生理鹽水+腹腔注射溶劑。分別于造模后6h，分批放血處死動物。收集血清、支氣管肺泡灌洗液(BALF)和肺組織。觀察和比較各組動脈血氣、肺干濕比、BALF中蛋白含量、肺組織病理，肺組織中氧化應(yīng)激和炎癥因子、抗氧化基因(HO-1、Trx-1)和轉(zhuǎn)錄因子(

28、Nrf2、NF-κB)及粘附分子ICAM-1的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1.各組大鼠PaO2的變化:采用One-way ANOVA檢驗，各組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=15.517，P=0.000)。LPS組較對照組降低，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.000）;而EbsL組與LPS比較，組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.060); EbsM組、EbsH組、Dex組均較LPS組高，組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P分別為0.041、0.

29、003、0.000)。Ebs抑制急性肺損傷大鼠動脈PaO2降低。
　　 2.各組大鼠PaCO2的變化:采用One-way ANOVA檢驗，各組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=13.815，P=0.000)。LPS組較對照組升高，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.000）;而EbsL組、EbsM組與LPS比較，組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P分別為0.332、0.070); EbsH組、Dex組均較LPS組降低，組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均=0.00

30、0)。Ebs改善大鼠急性肺損傷造成血氧交換障礙。
　　 3.各組大鼠肺組織濕重/干重(W/D)的變化:采用One-way ANOVA檢驗，各組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=17.862，P=0.000)。LPS組較對照組升高，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000);而EbsL組、EbsM組與LPS比較，組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P分別為0.336、0.087); EbsH組、Dex組均較LPS組降低，組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P分別為0.0

31、03、0.000)。Ebs減輕急性肺損傷大鼠肺濕干重比，表明Ebs可以減輕大鼠急性肺損傷造成的肺水腫。
　　 4.各組大鼠BALF中蛋白含量改變:采用One-way ANOVA檢驗，各組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=53.602，P=0.000)。LPS組較對照組升高，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.000）;而EbsL組、EbsM組與LPS比較，組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P分別為0.246、0.066); EbsH組、Dex組均較LPS組

32、降低，組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均=0.000)。Ebs減輕ALI大鼠BALF中蛋白含量，表明Ebs可以減輕大鼠ALI造成的肺血管通透性增加。
　　 5.各組大鼠病理改變:光鏡下可見C組肺泡結(jié)構(gòu)清晰，肺泡壁薄，肺泡壁與間質(zhì)內(nèi)無炎性細(xì)胞浸潤。LPS組血管周圍間隙增寬，肺間隔增寬，可見大量紅細(xì)胞以及中性粒細(xì)胞，部分肺間隔變薄、斷裂，肺泡腔內(nèi)可見出血、炎癥細(xì)胞及液體滲出。EbsL、EbsM組肺泡結(jié)構(gòu)部分被破壞，肺間隔增寬，肺泡腔內(nèi)有多

33、量滲出的紅細(xì)胞及炎性細(xì)胞浸潤。EbsH組、DEX組肺泡結(jié)構(gòu)保持相對完整，肺間隔稍增寬，肺泡腔內(nèi)紅細(xì)胞及炎性細(xì)胞的浸潤明顯減少。
　　 6.各組大鼠肺組織MDA變化:采用One-way ANOVA檢驗，各組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=7.149，P=0.000)。LPS組較對照組升高，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000); EbsM組、EbsH組、Dex組均較LPS組降低，組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P分別為0.027、0.009、0.

34、001）;而EbsL組、組與LPS比較，組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.187)。Ebs的應(yīng)用可降低ALI大鼠肺組織MDA含量，表明Ebs可以減少大鼠內(nèi)毒素性ALI氧自由基產(chǎn)生，減輕肺組織氧化應(yīng)激損傷。
　　 7.各組大鼠肺組織SOD變化:采用One-way ANOVA檢驗，各組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=13.064，P=0.000)。LPS組較對照組降低，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000); EbsM組、EbsH組、Dex組均

35、較LPS組升高，組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P分別為0.010、0.001、0.000);而EbsL組與LPS比較，組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.275）。Ebs的應(yīng)用可增加ALI大鼠肺組織SOD含量，表明Ebs可以抑制大鼠內(nèi)毒素性ALI造成的抗氧化酶降低，改善肺組織氧化應(yīng)激。
　　 8.各組大鼠肺組織MPO變化:采用One-way ANOVA檢驗，各組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=8.947，P=0.000)。LPS組較對照組升高，組間

36、差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000);、EbsH組、Dex組均較LPS組降低，組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P分別為0.013、0.001）;而EbsM組、EbsL組與LPS比較，組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P分別為0.158、0.059)。Ebs可降低ALI大鼠肺組織MPO含量，Ebs抑制內(nèi)毒素性ALI肺組織中性粒細(xì)胞在肺組織聚集。
　　 9.各組大鼠肺組織TNF-α變化:采用One-way ANOVA檢驗，各組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=43

37、.971，P=0.000)。LPS組較對照組升高，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000); EbsM組、EbsH組、Dex組均較LPS組降低，組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P分別為0.001、0.000、0.000);而EbsL組與LPS比較，組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.118)。Ebs的應(yīng)用可降低ALI大鼠肺組織TNF-α含量，表明Ebs減輕內(nèi)毒素性ALI大鼠肺組織促炎癥介質(zhì)TNF-α，抑制炎癥反應(yīng)發(fā)展。
　　 10.各組大鼠肺組

38、織IL-1β變化:采用One-way ANOVA檢驗，各組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=61.297，P=0.000)。LPS組較對照組升高，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000); EbsH組、Dex組均較LPS組降低，組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P分別為0.002、0.000);而EbsM組、EbsL組與LPS比較，組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P分別為0.262、0.059)。Ebs可降低ALI大鼠肺組織IL-1β含量，表明Ebs減輕內(nèi)毒素性ALI

39、大鼠肺組織促炎癥介質(zhì)IL-1β，起到抗炎作用。
　　 11.各組大鼠肺組織Trx-1蛋白表達(dá)變化:采用One-way ANOVA檢驗，各組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=58.187，P=0.000)。LPS組較對照組增高，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.047);而EbsM組、EbsH組均較LPS組升高，組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P分別為0.022、0.045);、EbsL組與LPS比較，組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P分別為0.945)。Ebs

40、的應(yīng)用可增加ALI大鼠肺組織Trx-1含量，表明Ebs能誘導(dǎo)內(nèi)毒素性ALI大鼠肺組織抗氧化因子Trx-1表達(dá)，抑制氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)。
　　 12.各組大鼠肺組織HO-1蛋白表達(dá)變化:采用One-way ANOVA檢驗，各組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=126.725，P=0.000)。LPS組較對照組增高，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.019）;而EbsL組、EbsM組、EbsH組均較LPS組增高，組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均為0.

41、000)。Ebs明顯增加ALI大鼠肺組織HO-1含量，表明Ebs能通過調(diào)節(jié)抗氧化因子表達(dá)的水平改善肺內(nèi)氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)。
　　 13.各組大鼠肺組織ICAM-1蛋白表達(dá)變化:采用One-way ANOVA檢驗，各組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=101.524，P=0.000)。LPS組較對照組增高，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000);而EbsL組、EbsM組、EbsH組均較LPS組明顯降低，組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P分別為0.0

42、21、0.000、0.000)。表明Ebs明顯降低內(nèi)毒素性ALI大鼠肺組織ICAM-1表達(dá)，抑制炎癥反應(yīng)發(fā)展。
　　 14.各組肺組織Nrf2蛋白表達(dá)變化:采用One-way ANOVA檢驗，各組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=91.602，P=0.000)。LPS組較對照組增高，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.034）;而EbsL組、EbsM組、EbsH組均較LPS組增高，組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P分別為0.001、0.000、0.00

43、0)。表明Ebs明顯誘導(dǎo)內(nèi)毒素性ALI大鼠肺組織Nrf2表達(dá)，增加機體抗炎、抗氧化能力。
　　 15.各組肺組織NF-κB蛋白表達(dá)變化:采用One-way ANOVA檢驗，各組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=46.037，P=0.000)。LPS組較對照組增高，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.000）;而EbsL組、EbsM組、EbsH組均較LPS組降低，組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P分別為0.011、0.000、0.000)。表明Ebs抑制