OIE標(biāo)準(zhǔn)布魯氏菌ELISA和PCR檢測(cè)方法在奶牛奶樣中的應(yīng)用研究.pdf

1、布魯氏菌病(以下簡(jiǎn)稱(chēng)布病)是由布魯氏菌(Brucella)引起的人畜共患病,在世界范圍內(nèi)導(dǎo)致巨大的經(jīng)濟(jì)損失,布魯氏菌是該病病原。隨著個(gè)體養(yǎng)牛戶(hù)的增加,奶牛布病的疫情呈逐年上升趨勢(shì),同時(shí)由于布病也可傳染給人,從而給人類(lèi)公共衛(wèi)生安全造成了嚴(yán)重隱患,因此采取一切措施防治牛布病刻不容緩。
　　 為探討以牛奶為材料檢測(cè)奶牛布魯氏菌感染的可行性,本研究在不同牛場(chǎng)收集檢測(cè)樣品包括奶液和血清。試驗(yàn)中首先選用奶液間接ELISA(M-I-ELISA

2、)進(jìn)行篩選,隨后結(jié)合間接ELISA做進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)室診斷,最終采用競(jìng)爭(zhēng)ELISA對(duì)被檢樣品進(jìn)行確診。結(jié)果顯示,Milk-I-ELISA與I-ELISA、C-ELISA具有較高的一致性。Milk-I-ELISA不僅能夠檢測(cè)個(gè)體奶樣還可以檢測(cè)混合奶樣。本試驗(yàn)中,Milk-I-ELISA檢測(cè)混合奶樣的靈敏度高,在臨床檢測(cè)過(guò)程中與血清檢測(cè)結(jié)果保持一致,適合牛群布病感染情況的監(jiān)測(cè),能夠第一時(shí)間做出早期診斷。
　　 本研究還建立了可鑒定布魯氏

3、菌屬的單重PCR以及鑒定布魯氏菌種的多重PCR。單重PCR以BCSP31為布魯氏菌屬特異性靶基因?yàn)榛A(chǔ),多重PCR的建立方法是以擴(kuò)增布魯氏菌長(zhǎng)度多態(tài)性基因IS711為基礎(chǔ)。結(jié)果顯示,單重PCR方法的特異性強(qiáng)只特異性的擴(kuò)增布魯氏菌DNA,對(duì)照菌株大腸桿菌、牛敗血性波氏桿菌、根瘤農(nóng)桿菌和蒼白桿菌等的擴(kuò)增結(jié)果均為陰性:靈敏度高,奶液中細(xì)菌檢測(cè)靈敏度為1.08×104CFU/mL;用建立的多重PCR對(duì)7株不同種來(lái)源的布魯氏菌體和基因組進(jìn)行鑒定,