唾液酸化修飾在人急性髓性白血病多藥耐藥性中的作用.pdf

1、　　目的：通過研究20種唾液酸糖基轉(zhuǎn)移酶(sialyltransferase,ST)基因在三對人急性髓性白血病(acute myeloid leukemia, AML) 細胞株及AML患者骨髓單個核細胞中的差異表達,明確這些ST基因與人AML多藥耐藥的相關性,從而為預測和診斷AML多藥耐藥性,尋求逆轉(zhuǎn)藥物提供新策略和靶點。
　　方法：
　　(1) 采用質(zhì)譜分析技術檢測人 AML 細胞株 HL60 及其耐阿霉素細胞株H

2、L60/ADR細胞表面N-糖鏈的組成差異。
　　(2) 采用real-time PCR技術檢測三對人AML細胞株及AML患者骨髓單個核細胞中的ST基因表達情況,篩選出差異表達3倍以上的ST基因。
　　(3) 特異性下調(diào)、上調(diào)差異表達的ST基因,檢測干擾、過表達前后HL60/ADR、HL60細胞在體內(nèi)、外對化療藥物敏感性的變化、PI3K/Akt信號通路的激活情況及P-gp、MRP1的表達情況。
　　(4) 特

3、異性PI3K/Akt信號通路抑制劑LY294002和Akt siRNA分別作用于HL60/ADR細胞,檢測抑制前后HL60/ADR細胞在體內(nèi)、外對化療藥物敏感性的變化。
　　結(jié)果：
　　(1) HL60和HL60/ADR細胞膜表面N-糖鏈的組成具有顯著差異。
　　(2) 7種ST基因在三對人AML細胞株及AML患者骨髓單個核細胞中表達具有顯著差異。
　　(3) 特異性下調(diào)HL60/ADR細胞中ST

4、8SIA4、上調(diào)HL60/ADR細胞中ST3GAL5時,該細胞的藥物敏感性增強,PI3K/Akt信號通路分子、P-gp、MRP1表達降低(P﹤0.05)；特異性下調(diào)HL60細胞中ST3GAL5、上調(diào)HL60細胞中ST8SIA4時,該細胞的藥物敏感性減弱,PI3K/Akt信號通路分子、P-gp、MRP1表達增高(P﹤0.05)。
　　(4) HL60/ADR細胞經(jīng)LY294002和Akt siRNA分別作用后,PI3K/Akt主