α2,8唾液酸轉(zhuǎn)移酶在人慢性粒細(xì)胞白血病多藥耐藥性中的作用.pdf

1、目的:
　　人慢性粒細(xì)胞白血病白血病(chronic myeloid leukemia, CML)是一種骨髓異常增生的惡性腫瘤，約占成人白血病的20％，但其發(fā)病機(jī)制仍未明確。由于與患者配型相合的造血干細(xì)胞短缺，故在臨床上化療成為了CML治療的首選方法。然而臨床數(shù)據(jù)顯示，大多的CML患者對化療藥物都有一定的耐藥性，阻礙了對CML的治療。隨著科學(xué)家們對糖蛋白、糖組學(xué)的深入研究，越來越多的學(xué)者將更多的目光投入到腫瘤與糖基化的研究。近年來

2、的研究表明，唾液酸糖基化修飾與腫瘤及其耐藥有著密切的聯(lián)系，但引起腫瘤發(fā)生發(fā)展及耐藥的機(jī)制也尚未明確。α2，8唾液酸轉(zhuǎn)移酶（α2，8-sialyltransferase）作為唾液酸轉(zhuǎn)移酶家族中的一員，與白血病的發(fā)生及耐藥有著密切的聯(lián)系，但引起CML耐藥的機(jī)制還尚未報道。本文通過研究6種α2，8唾液酸轉(zhuǎn)移酶在三對人慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株及CML患者外周血單個核細(xì)胞中的差異表達(dá)，找出α2，8唾液酸轉(zhuǎn)移酶與人CML多藥耐藥的潛在聯(lián)系，從而為診斷

3、、治療人慢性粒細(xì)胞白血病多藥耐藥提供新的策略和靶點。
　　方法:
　　(1)通過實時熒光定量PCR技術(shù)(real-time PCR，RT-PCR)定量檢測三對人CML細(xì)胞株及CML患者外周血單個核細(xì)胞中α2，8唾液酸轉(zhuǎn)移酶基因的表達(dá)情況。
　　(2)在三對人CML細(xì)胞株中，采用干擾和過表達(dá)技術(shù)特異性下調(diào)或上調(diào)差異表達(dá)3倍以上的α2，8唾液酸轉(zhuǎn)移酶基因，用RT-PCR、免疫蛋白印跡法分別檢測干擾或過表達(dá)前后K562/AD

4、R、K562細(xì)胞內(nèi)基因和蛋白水平的變化，以及PI3K/Akt信號通路主要分子的表達(dá)情況，MTT法進(jìn)行體外藥敏分析，體內(nèi)抗瘤實驗以及免疫組化分析檢測白血病裸鼠模型對抗腫瘤藥物敏感性分析，用流式分析檢測P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）的表達(dá)情況。
　　(3)用LY294002抑制PI3K/Akt信號通路中PI3K分子的表達(dá)， Akt shRNA干擾Akt的表達(dá)量，分別用上述方法分別檢測抑制前后K562/ADR細(xì)胞在

5、體內(nèi)、外對化療藥物敏感性的變化以及P-gp的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　(1)在三對人CML細(xì)胞株中，只有ST8SIA4和ST8SIA6的表達(dá)差異在3倍以上，具有顯著差異(P＜0.05)，其余4種α2，8唾液酸轉(zhuǎn)移酶基因無顯著差異或不表達(dá)。而在CML患者外周血單個核細(xì)胞中，也有相同的結(jié)果。
　　(2)特異性下調(diào)K562/ADR細(xì)胞中ST8SIA4、上調(diào)K562/ADR細(xì)胞中ST8SIA6時，該細(xì)胞的藥物敏感性增強(qiáng)(P＜

6、0.05);特異性上調(diào)K562細(xì)胞中ST8SIA4、下調(diào)K562細(xì)胞中ST8SIA6時，該細(xì)胞的藥物敏感性減弱(P＜0.05)。
　　(3)特異性下調(diào)K562/ADR細(xì)胞中 ST8SIA4，PI3K/Akt信號通路分子、P-gp表達(dá)降低(P＜0.05);特異性上調(diào)K562細(xì)胞中ST8SIA4，PI3K/Akt主要信號通路分子、P-gp表達(dá)增加(P＜0.05)。
　　(4) K562/ADR細(xì)胞經(jīng)LY294002或Akt sh

7、RNA分別作用后，PI3K/Akt信號通路主要分子表達(dá)水平降低，P-gp表達(dá)量也降低(P＜0.05)，并且增強(qiáng)了該細(xì)胞對抗腫瘤藥物的敏感性。
　　結(jié)論:
　　(1)在二對人慢性白血病細(xì)胞株及CML耐藥、非耐藥患者外周血單個核細(xì)胞中α2，8唾液酸轉(zhuǎn)移酶基因表達(dá)具有顯著差異，而這些差異表達(dá)與CML多藥耐藥具有相關(guān)性。
　　(2)α2，8唾液酸轉(zhuǎn)移酶引起CML多藥耐藥的機(jī)制很可能是通過ST8SIA4調(diào)控PI3K/Akt信號通