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文檔簡介
1、第一部分哮喘小鼠氣道重塑模型的制備 目的:制備哮喘小鼠氣道重塑模型。 方法:將清潔級雌性BALB/c純系小鼠30只,隨機分成正常對照組、哮喘組和咪喹莫特組,每組10只。于第0、14天以卵白蛋白(OVA)致敏,第24天霧化吸入1%OVA激發(fā)并持續(xù)28d,建立哮喘氣道重塑模型;咪喹莫特組在吸入OVA前2h霧化吸入咪喹莫特30分鐘;正常對照組以生理鹽水代替OVA。觀察3組小鼠氣道反應性,氣道病理學改變。 結(jié)果:①各組小
2、鼠的基礎呼氣阻力(Re)無差異(P>0.05),對生理鹽水激發(fā)無明顯反應;注射乙酰膽堿(Ach)進行激發(fā)時,各組小鼠Re隨Ach濃度升高而升高,哮喘組高于對照組(P<0.05),咪喹莫特組Re低于哮喘組(P<0.05),但略高于對照組;當Ach濃度為135ug/kg、405ug/kg時,哮喘組與對照組存在明顯差異(均有(P<0.05)。②哮喘組小鼠氣道壁明顯增厚,杯狀細胞增生,伴黏液高分泌,膠原過度沉積,管壁面積/支氣管管腔的內(nèi)周長(W
3、At/Pi),支氣管平滑肌面積/管腔的內(nèi)周長(WAm/Pi),支氣管平滑肌細胞核數(shù)管腔的內(nèi)周長(N/Pi)明顯增加,與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(均有P<0.05)。 結(jié)論:本試驗成功制備了哮喘小鼠氣道重塑模型,為進行下一步研究奠定了基礎。 第二部分咪喹莫特對哮喘小鼠氣道重塑的影響及機制 目的:觀察咪喹莫特對哮喘小鼠氣道重塑和肺組織轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)及其信號轉(zhuǎn)導分子Smads表達的影響。 方
4、法:建立哮喘氣道重塑模型,自第14天霧化吸入OVA前2h,干預組分別霧化吸入布地奈德或咪喹莫特30分鐘。正常對照組以生理鹽水代替OVA。最后一次霧化結(jié)束后24h,對肺組織切片行蘇木精-伊紅(HE)染色觀察病理學改變、過碘酸雪夫(AB-PAS)染色定量杯狀細胞百分比及黏液分泌、馬宋氏三色(Masson)染色測定膠原沉積;運用醫(yī)學圖像分析軟件測定WAt/Pi、WAm/Pi、N/Pi;用免疫組化法檢測肺組織TGF-β1的蛋白表達;用逆轉(zhuǎn)錄.聚
5、合酶鏈反應檢測肺組織TGF-β1mRNA以及Smad2,Smad7 mRNA表達。 結(jié)果:①哮喘組小鼠杯狀細胞增生明顯,伴黏液高分泌,氣管壁膠原過度沉積,WAt/Pi、WAm/Pi、N/Pi增高,與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(均有P<0.05);咪喹莫特組杯狀細胞輕度增生,黏液分泌減少,氣管壁膠原沉積減輕,wAt/Pi、WAm/Pi、N/Pi下降,與哮喘組比較差異有統(tǒng)計學意義(均有P<0.05)。②哮喘組TGF-β1蛋白和mRN
6、A、Smad2mRNA的表達較對照組增加,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),咪喹莫特組TGF-β1蛋白和mRNA、Smad2mRNA的表達下降,與哮喘組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05);哮喘組Smad7mRNA的表達較對照組下降(P<0.05),咪喹莫特可顯著上調(diào)Smad7mRNlA的表達,與哮喘組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 結(jié)論:早期霧化吸入咪喹莫特通過抑制慢性哮喘小鼠肺組織TGF-p1蛋白和mRNA、Sma
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