腺病毒12型E1B55k降解Daxx蛋白對卵巢癌化療增敏.pdf

1、目的：Death domain associate protein(Daxx)在人類正常細胞中具有促凋亡的作用。而其在腫瘤細胞中是發(fā)揮促凋亡還是抗凋亡作用尚未達成共識。致力于明確 Daxx在人卵巢癌細胞中的作用，并尋找針對Daxx這一靶蛋白而使卵巢癌化療增敏的方法。
　　方法：選取卵巢癌DDP化療敏感株OV2008和耐藥株C13k這一配對細胞進行研究。流式細胞技術檢測這一對細胞對DDP（順鉑）敏感性的差異，western-blot

2、檢測Daxx在這兩株細胞中基礎表達量的差異以及在DDP作用下表達量變化的差異。構建Daxx過表達質粒、siRNA及包含腺病毒12型E1B-55k的慢病毒，在ov2008及c13k細胞中分別轉染siRNA和Daxx的過表達質粒,CCK8法及流式細胞儀測凋亡法檢測轉染前后這兩株細胞對DDP敏感性變化的差異。在c13k細胞中分別轉染包含腺病毒12型E1B-55k的慢病毒和其陰性對照慢病毒，CO-IP法檢測腺病毒12型E1B-55k和Daxx兩

3、種蛋白在卵巢癌細胞中的相互關系，western-blot法檢測在腺病毒12型E1B-55k作用下Daxx蛋白水平的變化，流式細胞儀法測兩株細胞對DDP敏感性的變化。
　　結果：敏感株細胞ov2008 Daxx的基礎表達量較低，隨著DDP藥物濃度的增加Daxx蛋白表達量整體呈現(xiàn)降低的趨勢，轉入過表達質粒Daxx后能使ov2008細胞對DDP化療藥的敏感性降低。耐藥株細胞 c13k中 Daxx的基礎表達量較高，轉入 Daxx的siRN

4、A后能明顯增加c13k對化療藥DDP的敏感性。CO-IP及western-blot證明在卵巢癌細胞內腺病毒12型E1B-55k蛋白與Daxx蛋白結合，通過酶解的方式降低Daxx蛋白在卵巢癌細胞中的含量，而且 DDP化療藥可以使這一酶解效應增強，最終這一效應導致卵巢癌細胞對化療藥DDP的敏感性增加。
　　結論： Daxx是卵巢癌化療耐藥的一個關鍵因素。腺病毒12型E1B-55k可以通過降低卵巢癌細胞中Daxx的蛋白水平而起到化療增敏