腺病毒12型E1B55k降解Daxx蛋白對(duì)卵巢癌化療增敏.pdf

1、目的：Death domain associate protein(Daxx)在人類正常細(xì)胞中具有促凋亡的作用。而其在腫瘤細(xì)胞中是發(fā)揮促凋亡還是抗凋亡作用尚未達(dá)成共識(shí)。致力于明確 Daxx在人卵巢癌細(xì)胞中的作用，并尋找針對(duì)Daxx這一靶蛋白而使卵巢癌化療增敏的方法。
　　方法：選取卵巢癌DDP化療敏感株OV2008和耐藥株C13k這一配對(duì)細(xì)胞進(jìn)行研究。流式細(xì)胞技術(shù)檢測這一對(duì)細(xì)胞對(duì)DDP（順鉑）敏感性的差異，western-blot

2、檢測Daxx在這兩株細(xì)胞中基礎(chǔ)表達(dá)量的差異以及在DDP作用下表達(dá)量變化的差異。構(gòu)建Daxx過表達(dá)質(zhì)粒、siRNA及包含腺病毒12型E1B-55k的慢病毒，在ov2008及c13k細(xì)胞中分別轉(zhuǎn)染siRNA和Daxx的過表達(dá)質(zhì)粒,CCK8法及流式細(xì)胞儀測凋亡法檢測轉(zhuǎn)染前后這兩株細(xì)胞對(duì)DDP敏感性變化的差異。在c13k細(xì)胞中分別轉(zhuǎn)染包含腺病毒12型E1B-55k的慢病毒和其陰性對(duì)照慢病毒，CO-IP法檢測腺病毒12型E1B-55k和Daxx兩

3、種蛋白在卵巢癌細(xì)胞中的相互關(guān)系，western-blot法檢測在腺病毒12型E1B-55k作用下Daxx蛋白水平的變化，流式細(xì)胞儀法測兩株細(xì)胞對(duì)DDP敏感性的變化。
　　結(jié)果：敏感株細(xì)胞ov2008 Daxx的基礎(chǔ)表達(dá)量較低，隨著DDP藥物濃度的增加Daxx蛋白表達(dá)量整體呈現(xiàn)降低的趨勢，轉(zhuǎn)入過表達(dá)質(zhì)粒Daxx后能使ov2008細(xì)胞對(duì)DDP化療藥的敏感性降低。耐藥株細(xì)胞 c13k中 Daxx的基礎(chǔ)表達(dá)量較高，轉(zhuǎn)入 Daxx的siRN

4、A后能明顯增加c13k對(duì)化療藥DDP的敏感性。CO-IP及western-blot證明在卵巢癌細(xì)胞內(nèi)腺病毒12型E1B-55k蛋白與Daxx蛋白結(jié)合，通過酶解的方式降低Daxx蛋白在卵巢癌細(xì)胞中的含量，而且 DDP化療藥可以使這一酶解效應(yīng)增強(qiáng)，最終這一效應(yīng)導(dǎo)致卵巢癌細(xì)胞對(duì)化療藥DDP的敏感性增加。
　　結(jié)論： Daxx是卵巢癌化療耐藥的一個(gè)關(guān)鍵因素。腺病毒12型E1B-55k可以通過降低卵巢癌細(xì)胞中Daxx的蛋白水平而起到化療增敏