基因溶瘤腺病毒SG635-SF對卵巢癌的作用研究.pdf

1、背景:近年來，中國卵巢癌的發(fā)病率不斷增加。由于早期卵巢癌缺乏典型癥狀和成熟的診斷，發(fā)現(xiàn)時(shí)一般已處于晚期。目前，對于癌癥治療手段非常有限，單靠手術(shù)，放療化療切除卵巢癌，效果很不理想。因此，迫切需要尋找一種新型的卵巢癌治療手段。目前研究發(fā)現(xiàn)，免疫治療能在腫瘤臨床治療中發(fā)揮巨大作用。溶瘤腺病毒是一種較為常見的免疫治療方法，可以提高針對腫瘤細(xì)胞的免疫治療作用。溶瘤腺病毒是經(jīng)過基因工程改造，能特異性感染腫瘤細(xì)胞并且能在腫瘤細(xì)胞中完成自我復(fù)制，導(dǎo)致

2、腫瘤裂解的增殖型腺病毒。這種病毒缺乏正常細(xì)胞復(fù)制所必須的基因，所以對正常細(xì)胞不產(chǎn)生殺傷作用。
　　CD47是一種細(xì)胞表面分子，是免疫球蛋白(Ig)超家族的一員，可以和整合素，血小板反應(yīng)蛋白等蛋白結(jié)合，并參與細(xì)胞遷移，T細(xì)胞和樹突細(xì)胞(DC)的激活，軸突發(fā)展等不同的生理過程。CD47和免疫逃避有關(guān)，能在很多腫瘤細(xì)胞表面高表達(dá)，其機(jī)制是和巨噬細(xì)胞表面SIRPα結(jié)合后，可以釋放“別吃我”信號，從而逃避巨噬細(xì)胞的吞噬作用，實(shí)現(xiàn)免疫逃避的目

3、的。信號調(diào)節(jié)蛋白α(SIRPα)是抑制性受體，SIRPα表達(dá)相對受限于骨髓細(xì)胞，比如巨噬細(xì)胞，粒細(xì)胞，樹突細(xì)胞等。SIRPα是參與調(diào)解白細(xì)胞功能的膜蛋白成員之一，CD47是其配體，兩者構(gòu)成SIRPα-CD47途徑。在SIRPα-CD47途徑中，表達(dá)于巨噬細(xì)胞表面的SIRPα和腫瘤細(xì)胞表面的CD47結(jié)合，將其識別為“自我細(xì)胞”，從而抑制了巨噬細(xì)胞的吞噬作用。SIRPα-CD47還能使巨噬細(xì)胞識別正常細(xì)胞和受損、老化細(xì)胞，使這部分細(xì)胞被清除

4、。
　　結(jié)果:在本研究中，構(gòu)建攜帶SIRPα(CV1)-IgG1 Fc基因片段的溶瘤腺病毒SG635-SF，考察其對人卵巢癌細(xì)胞體外模型，裸鼠卵巢癌移植瘤體內(nèi)模型的治療效果。主要結(jié)果有以下6方面。
　　1、成功構(gòu)建溶瘤腺病毒SG635-SF。通過分子克隆技術(shù)成功構(gòu)建了p74-TP-CCAU-SF質(zhì)粒，包裝成35型SG635-SF溶瘤腺病毒。
　　2、SG635-SF溶瘤腺病毒能表達(dá)SF基因片段。Western Blot

5、ting，ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，SG635-SF溶瘤腺病毒能成功表達(dá)SF融合蛋白。
　　3、溶瘤腺病毒SG635-SF在卵巢癌細(xì)胞SK-OV-3，HO8910中有較強(qiáng)的增殖能力和殺傷作用。病毒增殖實(shí)驗(yàn)說明，SG635-SF和對照病毒SG635能在人卵巢癌細(xì)胞HO8910及SK-OV-3細(xì)胞中有效增殖，在48h時(shí)，增殖效率為100倍。MTT實(shí)驗(yàn)說明，相比于溶瘤腺病毒SG635，帶外源基因SF的溶瘤腺病毒SG635-SF對人卵巢癌細(xì)

6、胞有著更好的殺傷作用。
　　4、融合蛋白SF能結(jié)合并封閉CD47。溶瘤腺病毒SG635-SF感染細(xì)胞后，依據(jù)流式細(xì)胞儀結(jié)果和免疫熒光顯微鏡結(jié)果我們發(fā)現(xiàn)，SF融合蛋白能結(jié)合并封閉卵巢癌細(xì)胞HO8910及SK-OV-3表面的CD47。
　　5、溶瘤腺病毒SG635-SF能誘導(dǎo)人卵巢癌細(xì)胞HO8910及SK-OV-3凋亡。用增殖型SG635，SG635-SF，非增殖型Ad-SF，Ad-blank感染HO8910細(xì)胞后，發(fā)現(xiàn)增殖型S

7、G635-SF感染的細(xì)胞凋亡明顯，說明，封閉人卵巢癌細(xì)胞上的CD47的確能有效引起該細(xì)胞凋亡。
　　6、在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，溶瘤腺病毒SG635-SF和SG635能抑制裸鼠卵巢癌移植瘤的生長。在裸鼠皮下注射人卵巢癌細(xì)胞HO8910，建立移植瘤模型，用溶瘤腺病毒SG635-SF，SG635進(jìn)行治療，結(jié)果數(shù)據(jù)對比顯示，溶瘤腺病毒能抑制腫瘤生長，并且SG635-SF效果良好，說明溶瘤腺病毒SG635-SF在裸鼠體內(nèi)有一定的抗腫瘤作用。