結核疫苗評價用豚鼠Ⅰ型過敏反應檢測方法的建立.pdf

1、疫苗接種引起的不良反應是疫苗安全性評價中存在的主要問題之一，其中，與免疫毒性相關的不良反應居多，并以Ⅰ型過敏反應最為常見和兇險。近年來，國內外公布的與疫苗免疫毒性評價相關的指導原則中多以大鼠和小鼠作為Ⅰ型過敏反應的動物模型，對其評價主要以觀察過敏體征為主。此方法主觀性強、難以量化和標準化，缺乏合理有效的評價模型和方法。本研究以Ⅰ型過敏反應最敏感的豚鼠為動物模型，通過對其致敏條件進行標準化，初步建立了評價Ⅰ型過敏反應的檢測指標及方法，客觀

2、、量化的反映了過敏反應的發(fā)生情況，并經乙肝疫苗和恥垢疫苗對檢測方法的有效性進行驗證。本研究主要包括以下三個部分的實驗內容：
　　 1.血清中過敏抗體水平的檢測：對過敏模型豚鼠的免疫方式進行標準化，建立Ⅰ型過敏反應豚鼠模型，通過鹽析及親和層析法，初步制備豚鼠血清過敏抗體（IgG和IgE）參考品。連續(xù)被動皮膚過敏試驗（passive cutaneous anaphylaxis，PCA）證實IgG同樣參與了豚鼠過敏反應，并且較IgE作

3、用可能更為迅速、短暫。ELISA法檢測各疫苗免疫組IgG1水平，結果各免疫組特異性IgG1水平均較對照組明顯升高，而總IgG1水平僅OVA組較對照組有所升高。
　　 2.過敏性介質含量檢測：通過建立支氣管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavagefluid，BALF）、腹腔灌洗液中肥大細胞和外周血中嗜堿性粒細胞（basophilgranulocyte，Ba）的收集和分離方法，檢測各樣本中過敏性介質如組胺和白三烯C4

4、（leucotriene C4，LTC4）的含量，結果僅OVA組過敏介質含量較對照組明顯升高。
　　 3.細胞學檢測及其他檢測方法：瑞姬氏染色顯示OVA組中Ba和嗜酸性粒細胞（eosinophil granulocyte，Eo）均較對照組明顯升高。中性紅細胞染色表明OVA組豚鼠外周血中Ba所占比例較對照組顯著升高。ELISA法檢測發(fā)現(xiàn)在豚鼠肺、肝和腎組織勻漿中IgE含量較多。免疫組織化學顯示IgE主要在肺小血管壁和支氣管粘膜上皮

5、細胞漿及脾髓質細胞內呈陽性表達，而在心、肝、腎組織中無特異表達。
　　 綜上所述，標準化后的Ⅰ型過敏反應豚鼠模型在激發(fā)后能出現(xiàn)典型的過敏癥狀及病理改變，用所選取的公認參與Ⅰ型過敏反應的細胞和分子作為評價指標，其水平較對照組均有明顯升高，說明能夠用所建立的指標對疫苗Ⅰ型過敏反應進行客觀量化和系統(tǒng)的評價。本研究在國內首次系統(tǒng)地用量化檢測方法對疫苗可能引起的Ⅰ型過敏反應進行評價，并初步制備了檢測用參考品，彌補了Ⅰ型過敏反應缺少定量檢測