白血病細(xì)胞來源微泡水平傳遞BCR-ABL1融合基因及其蛋白惡性改造間充質(zhì)干細(xì)胞.pdf

1、目的：腫瘤細(xì)胞與腫瘤微環(huán)境組分尤其是間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)存在豐富的信息交流,在腫瘤疾病進(jìn)展中具有非常重要的作用。但是,腫瘤細(xì)胞與MSCs進(jìn)行對(duì)話(cross-talk)的確切機(jī)制尚不清楚。本課題以K562白血病細(xì)胞為模型,研究白血病細(xì)胞來源微泡(MVs)對(duì)MSCs的影響及其分子機(jī)制,意在闡明腫瘤相關(guān)病理機(jī)制并為開發(fā)新的腫瘤治療策略提供思路。
　　方法：應(yīng)用新型全骨髓貼壁培養(yǎng)法分離培養(yǎng)人MSCs,通過細(xì)胞形態(tài)特征、表面標(biāo)記和多向

2、誘導(dǎo)分化等進(jìn)行鑒定;差異離心法分離K562-MVs,應(yīng)用激光共聚焦、透射電鏡和流式細(xì)胞術(shù)觀察其特征。RT-PCR及Western-blot證實(shí)K562-MVs和MSCs內(nèi)BCR-ABL1mRNA及蛋白的表達(dá)。激光共聚焦顯微鏡觀察K562-MVs與MSCs的融合過程。MTT和CCK8檢測(cè)K562和MSCs增殖;RT-PCR及ELISA觀察K562-MVs對(duì)MSCs分泌細(xì)胞因子的影響;采用RNase酶消化MV中的RNA組分,初步探討MV改造

3、MSCs的機(jī)制。
　　結(jié)果：采用新型全骨髓貼壁培養(yǎng)法成功分離培養(yǎng)人MSCs,經(jīng)鑒定其符合MSCs表型,并具有多向分化能力。體外觀察到K562細(xì)胞可分泌大小不一、直徑約為0.1-1μm的球形MVs,并證實(shí)K562-MVs內(nèi)表達(dá)BCR-ABL1mRNA及融合蛋白。激光共聚焦顯微鏡顯示K562-MV能夠通過直接融合方式進(jìn)入MSCs,部分進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)。K562-MVs與MSCs的融合能夠?qū)CR-ABL1mRNA及其蛋白水平傳遞至MSCs