人肝來源間充質干細胞的分離及其特點的研究.pdf

1、目的:
　　從人肝中分離間充質干細胞（aLHMSCs），檢測分析其表面標志、蛋白、基因表達情況及多向分化能力，并通過間接共培養(yǎng)的方式探索其對活化的人星狀細胞的影響。
　　方法:
　　從本院肝移植中心獲得人肝組織后，通過Dispase-膠原酶四步灌流法，密度梯度離心和貼壁篩選法得到aLHMSCs。應用流式細胞術檢測其表面標志，細胞免疫熒光檢測其表面蛋白，RT-PCR檢測基因;并通過誘導培養(yǎng)基誘導檢測其成脂成骨成肝的能力。

2、另外，將其與永生化肝星狀細胞HSC-Li間接共培養(yǎng)，探索其對HSC-Li活化的影響。
　　結果:
　　從人肝中分離得到的aLHMSCs成纖維狀，表達間充質干細胞的表面標志（CD73，CD29，CD105，CD44和CD90）;不表達造血干細胞的表面標志（CD34，CD45，CD117和CD133）、肝祖細胞標志（CK19，CD326，CD117，CD34和AFP)以及肝星狀細胞標志（CK19和HLA-Ⅱ類分子），所以aLHM

3、SCs不是造血細胞來源，也不同于肝祖細胞和肝星狀細胞。aLHMSCs表達干細胞標志Vimentin及肝細胞標志CK18，CK8和ALB，說明其既有干細胞又有肝細胞特性。另外，該細胞可向脂肪細胞、成骨細胞和肝細胞方向分化。分化獲得的肝樣細胞肝細胞特異性基因上調，具有肝細胞特異性功能，如糖原儲存，低密度脂蛋白攝取，細胞色素P450，白蛋白合成和尿素分泌。此外，aLHMSCs可通過分泌細胞因子來抑制HSC-Li的活化，其中TNF-α參與了抑制