GE11肽介導的靶向脂質體抗腫瘤作用及攝取機制的研究.pdf

1、目的：本文以A549細胞表面過度表達的EGFR為靶點，旨在制備新型多肽GE11修飾的阿霉素脂質體，考察GE11修飾脂質體的體外靶向效率、細胞毒性、攝取能力，對GE11修飾脂質體在腫瘤部位不同時間的分布進行體內評價，并研究GE11修飾脂質體的攝取機制，為非小細胞肺癌的靶向治療提供實驗依據(jù)。
　　方法：本研究通過加成反應合成DSPE-PEG2000-GE11，通過核磁共振氫譜（1H-NMR）和紅外光譜（FITR）驗證產物結構，采用高效

2、液相色譜（HPLC）分析GE11與DSPE-PEG2000-Mal的連接率。利用薄膜分散-后插入法制備GE11修飾阿霉素脂質體（GE11-LP/DOX），并應用DLS、TEM和HPLC對脂質體的粒徑、電位、形貌和包封率進行表征。通過MTT實驗篩選脂質體表面連接GE11的最佳密度和測定脂質體的IC50值，采用熒光顯微鏡、流式細胞儀對脂質體的攝取分別進行定性和定量考察。采用近紅外活體成像儀動態(tài)觀察脂質體在腫瘤組織的聚集過程。通過流式細胞儀和

3、共聚焦顯微鏡分別考察脂質體的內吞機制和細胞內定位。
　　結果：1H-NMR和FTIR結果證實合成了DSPE-PEG2000-GE11，GE11與DSPE-PEG2000-Mal的連接率為90%。制備的不同GE11密度修飾的脂質體粒徑在124nm左右，zeta電位在-10mv左右，TEM觀察脂質體為類圓形囊泡，阿霉素的包封率大約為92%。靶頭密度篩選表明脂質體表面的GE11密度與靶向效率有關，10%GE11修飾脂質體對A549細胞的

4、靶向效率最高。GE11-LP/DOX的IC50值（1.29μg/mL）比對照組PEG-LP/DOX的IC50值（3.35μg/mL）低2.6倍。細胞攝取結果表明，在相同時間內，與PEG-LP/DOX相比GE11-LP/DOX更容易被攝取進入細胞。在一定時間內，兩種脂質體逐漸向腫瘤組織聚集，而GE11-LP/DOX在腫瘤組織的熒光強度明顯強于PEG-LP/DOX組。低溫和能量耗竭降低了細胞對PEG-LP/DOX和GE11-LP/DOX的攝

5、取，抑制劑氯丙嗪和秋水仙素對兩種脂質體的攝取有抑制作用，共聚焦顯微鏡觀察GE11-LP/DOX內吞進入細胞后與溶酶體融合。
　　結論：本研究合成了DSPE-PEG2000-GE11，通過后插入法制備了GE11-LP/DOX。體外細胞實驗表明脂質體表面連接的GE11與EGFR識別并結合，促進細胞對脂質體的攝取，增強了脂質體對細胞的毒性；活體熒光成像實驗表明GE11-LP/DOX聚集在裸鼠的腫瘤部位，并且主動靶向腫瘤組織。細胞攝取GE