負載siRNA的EGFR靶向陽離子脂質體的制備和抗腫瘤機制研究.pdf

1、乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，已成為女性健康的“頭號殺手”。目前乳腺癌的治療手段主要有手術治療、內分泌治療、放療和化療，但是這些治療方法的效果還很有限，無法達到長期緩解或治愈，甚至具有嚴重的并發(fā)癥。近年來隨著分子生物學和生物化學的快速發(fā)展，如何從分子水平上真正認識和治療疾病逐漸成為人們關注的焦點。如今基因治療已經(jīng)取得了突破性進展，已用于腫瘤、心血管疾病、自身免疫病及病毒感染等危害較大而且不能有效治療的疾病。但是，目前基因治療面臨的一

2、大障礙就是基因藥物的遞送問題，只有基因藥物安全有效的遞送入體內才能達到理想的治療效果。
　　 RNA干擾(RNA interference，RNAi)是一種由雙鏈RNA小分子片段(smallinterfering RNAs，siRNA)引起與其同源mRNA的特異性基因沉默現(xiàn)象。因RNAi具有特異，高效和持久等特點，其研究和應用現(xiàn)已成為分子生物學研究中的熱點，同時該技術也為相關臨床疾病的基因干預治療開辟了一條新途徑。
　　

3、 DC-chol脂質體是第一個通過美國FDA認證的用于臨床試驗的陽離子脂質體，它的安全性也在體內治療囊性纖維病中得以證明。目前，由3β-[N-(N'，N'-二甲氨基乙基)氨甲酰基]膽固醇(DC-chol)和二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)組成的陽離子脂質體被認為是最有效的基因遞送系統(tǒng)之一。DC-chol/DOPE脂質體具有生物相容性和低細胞毒性的特點。但是，DC-chol/DOPE脂質體的進一步發(fā)展因其低轉染效率，低血清穩(wěn)定性而受到嚴重阻

4、礙。如果能夠克服這些困難，那么DC-chol/DOPE脂質體就能得到更好的臨床應用。
　　 本課題在前期工作基礎上，通過在PEG化的DC-chol/DOPE脂質體表面連接Anti-HER1-Fab'片段制備出一種能夠靶向遞送藥物到HER1(EGFR)高表達乳腺癌細胞的免疫脂質體，解決了脂質體遞送藥物特異性差的問題。我們使用GFP基因作為靶基因，對HER1過表達的MDA-MB-231細胞進行基因沉默。結果顯示，用低壓凍干/再水化法

5、制備的PIL(LPIL)與PIL相比有明顯促進的基因沉默的效果。在一系列的不同PEG含量LPIL中，2.5％PEG的LPIL顯示出最好的HER1基因沉默效率。共聚焦顯微鏡研究顯示，2.5％PEG的LPIL能夠特異性結合MDA-MB-231細胞并且被序列特異性的內吞入細胞。使用RhoA作為腫瘤治療靶點，2.5％PEG的LPIL包裹抗-RhoA siRNA能夠特異性沉默RhoA表達并抑制MDA-MB-231細胞的侵襲。總之，這些研究表明，使