核素標(biāo)記重組人纖溶酶原Kringle5的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本研究擬采用基因工程技術(shù)制備重組人纖溶酶原kringle5蛋白(rhK5)進(jìn)行初步的放射性核素標(biāo)記的體內(nèi)生物分布、血流動(dòng)力學(xué)、顯像和治療實(shí)驗(yàn)研究。 方法1.采用PCR方法擴(kuò)增出K5基因后，克隆進(jìn)原核表達(dá)載體pET-22b(+)，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21，IPTG(1mM)誘導(dǎo)表達(dá)重組人源纖溶酶原Kringle5His·Tag融合蛋白(rhK5)，并通過Ni2+-IDASephrose6B樹脂親合純化。 2.為了用于血流動(dòng)

2、力學(xué)、體內(nèi)分布和腫瘤顯像治療研究，以Idogen法制備125I-rhK5和131I-rhK5；以直接法制備99mTc-rhK5；采用MTT法檢測(cè)放射性核素標(biāo)記rhK5活性；競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合試驗(yàn)觀察125I-rhK5對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞ECV304的親合作用。 3.初步觀察131I-rhK5腫瘤治療效果，使用病理和免疫組化方法進(jìn)一步觀察其治療作用。 研究表明：1.K5基因克隆、表達(dá)和純化成功，獲得大量具有生物學(xué)活性的rhK5蛋白。2.Id