SLC26A4基因及其致聾突變在COs-7細胞中的表達與功能分析.pdf

1、中圖分類號UDC博士學位論文學校代碼!Q53呈密級公玨SLC26A4基因及其致聾突變在COS7細胞中的表達與功能分析Functionalanalysisofpendrin(SLC26A4)anditspathogenicmutationsinCOS7cells作者姓名：學科專業(yè)：研究方向：學院(系、所)：指導教師：論文答辯日期張海林臨床醫(yī)學耳鼻咽喉科學湘雅醫(yī)院馮永教授答辯委員會主席中南大學二零一三年五月一苓一二年血月SLC26A4基因及

2、其致聾突變在COS一7細胞中的表達與功能分析摘要SLC26A4突變所致疾病為常染色體隱|生遺傳，目前已發(fā)現(xiàn)200多種不同的突變類型，可導致Pendred綜合征和DFNB4(OMIM600791)非綜合征型遺傳性耳聾。Pendred綜合征臨床表現(xiàn)為甲狀腺腫大(甲狀腺功能正?；蜉p微降低)和耳聾。SLC26A4突變導致的耳聾常常伴隨有內耳畸形，其中最常見的畸形是前庭導水管擴大(enlargedvestibularaqueductEVA)和Mo

3、ndim畸形。Pendrin在內耳主要參與CI。、HC03‘的轉運，與維持耳蝸內環(huán)境穩(wěn)定有關。另外，pendrin蛋白不直接調節(jié)鉀離子的跨膜轉運，但研究發(fā)現(xiàn)Pendrin對維持耳蝸內電位(鉀離子平衡電位)產生聽覺起到至關重要的作用。本研究以本實驗室首先發(fā)現(xiàn)的SLC26A4致耳聾突變$448X，以及構建的$448X突變體和野生型SLC26A4與GFP融合基因表達質粒為基礎，分別體外轉染細胞，Westemblot檢測驗證蛋白表達，然后直接觀

4、察融合蛋白綠色熒光，同時對內質網(ER)，高爾基體(Golgi)，微管組織免疫熒光染色，利用免疫熒光的方法觀察突變體pendrin蛋白的亞細胞定位改變。另一方面，利用膜片鉗技術記錄分別表達野生型和突變體的細胞的全細胞電流的差異，明確SLC26A4基因突變對細胞氯離子和鉀離子轉運能力的影響。目的：觀察SLC26A4基因及其一個致聾突變$448X在體外細胞中的表達與功能改變，以探討其致病的可能機理。方法：將已構建完成的突變$448X和野生型