高表達(dá)IDO基因的樹突細(xì)胞及色氨酸代謝產(chǎn)物抑制移植排斥反應(yīng)的實驗.pdf

1、本文對高表達(dá)IDO基因的樹突細(xì)胞及色氨酸代謝產(chǎn)物抑制移植排斥反應(yīng)進(jìn)行了實驗研究。本研究分為兩個部分：
　　 第一部分：
　　 目的：探討轉(zhuǎn)染吲哚胺2，3-雙加氧酶(indoleamine2，3-dioxygenase，IDO)基因并獲得高表達(dá)的小鼠骨髓來源成熟樹突狀細(xì)胞(Dendritic Cell，DC)及色氨酸代謝產(chǎn)物(Tryptophan Catabolites，TC)，通過體內(nèi)外相結(jié)合的方法，探討其對T淋巴細(xì)胞增

2、殖、凋亡的影響，為臨床抑制器官移植排斥反應(yīng)，成功誘導(dǎo)移植后免疫耐受開辟新途徑。
　　 方法：⑴采用培養(yǎng)基細(xì)胞因子選擇法體外培養(yǎng)小鼠骨髓來源DC，流式細(xì)胞儀檢測DC表面抗原CD80、CD86、MHCⅡ、CD11c的表達(dá)情況。⑵利用攜帶IDO基因的腺病毒感染小鼠成熟DC，倒置熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染后DC中綠色熒光蛋白的表達(dá)，HPLC檢測IDO的表達(dá)。⑶免疫磁珠法陽性分選同種異系小鼠脾臟CD4+T淋巴細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測CD4+T淋巴細(xì)

3、胞的陽性率。⑷在體外實驗中，以同種異系(BALB/c)小鼠脾CD4+T淋巴細(xì)胞為反應(yīng)細(xì)胞，分別以供體DC、DC+TC、IDO+DC和IDO+DC+TC為刺激細(xì)胞進(jìn)行單向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)。在體內(nèi)實驗中，分別以供體DC、TC、IDO+DC及IDO+DC+TC輸注同種異系小鼠體內(nèi)，5天后分別獲取其脾CD4+T淋巴細(xì)胞為反應(yīng)細(xì)胞，與供體DC行單向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)。同時，在IDO+DC+TC注射組，分別以供體(C57BL/6)DC及第三系(C3H

4、/He) DC為刺激細(xì)胞，行單向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)。MTS法檢測各組CD4+T淋巴細(xì)胞的增殖情況，Annexin-v及PI雙染法分析其凋亡情況。使用SPSS18.0軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。
　　 結(jié)果：①經(jīng)體外培養(yǎng)，每只小鼠可獲得5-6×106個具備典型樹突狀結(jié)構(gòu)的骨髓來源DC，其中C57 DC表面高表達(dá)CD80（97.5％±2.1）、CD86（92.0％±1.3）、MHC-Ⅱ（97.0％±1.6）、CD11c（89.1％±3.1）。

5、②IDO+DC轉(zhuǎn)染DC最佳MOI為300，轉(zhuǎn)染效率為73.4％。HPLC檢測IDO活性，即犬尿氨酸特異代謝率為61％。③免疫磁珠法可分選出純度達(dá)96％以上的CD4+T細(xì)胞，用于單向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)。④體內(nèi)外實驗中，IDO+DC及TC均能抑制同種異系CD4+T細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)其凋亡(P＜0.01)，而IDO+DC+TC較前兩者對CD4+T細(xì)胞作用更強(qiáng)(P＜0.01)。在注射IDO+DC+TC組，供體DC組較第三系DC組顯著抑制CD4+T細(xì)胞

6、增殖，誘導(dǎo)其凋亡(P＜0.01)。
　　 結(jié)論：高表達(dá)IDO的DC聯(lián)合TC抑制同種異系小鼠脾臟CD4+T淋巴細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)其凋亡能力較單一因素作用時更為顯著，并可能誘導(dǎo)針對供體的抗原特異性免疫抑制。
　　 第二部分：
　　 目的：本研究的目的是通過分析腫瘤大小及陽性淋巴結(jié)的Log率(Log odds of positivelymph nodes，LODDS)分類對胃癌患者的預(yù)后影響，從而進(jìn)一步對第七版國際抗癌聯(lián)盟

7、TNM分期系統(tǒng)在預(yù)測胃癌患者預(yù)后及分期精確性與否方面進(jìn)行探討。
　　 方法：回顧性分析天津醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院2003年至2008年收治的484例胃癌患者的臨床病理資料。首先分析腫瘤大小與臨床病理特征間的關(guān)系及其在胃癌患者中的預(yù)后價值，比較同一分期當(dāng)中不同腫瘤大小的預(yù)后差異。其次，應(yīng)用最佳截點方法對LODDS進(jìn)行分類，研究LODDS分類對胃癌患者的預(yù)后影響，同時對LODDS分類及第七版國際抗癌聯(lián)盟pN分期與淋巴結(jié)獲取數(shù)目間的關(guān)系

8、進(jìn)行探討，以進(jìn)一步對LODDS分類與pN分期在評估胃癌患者預(yù)后方面的優(yōu)越性進(jìn)行比較。
　　 結(jié)果：⑴腫瘤大小的最佳截點為5cm，根據(jù)腫瘤大小的最佳截點，將患者劃分為小直徑組(＜5cm)與大直徑組(≥5cm)，腫瘤大小與腫瘤部位、手術(shù)方式、侵犯深度以及N分期相關(guān)(P＜0.001)。小直徑組患者的生存率明顯高于大直徑組患者，多因素分析顯示腫瘤大小是影響胃癌患者預(yù)后的獨立因素。第七版國際抗癌聯(lián)盟Ⅱ期及Ⅲ期患者中大、小直徑組的預(yù)后差異具

9、有統(tǒng)計學(xué)意義。然而，Ⅰ期患者中大、小直徑組患者的生存期并無明顯差異。⑵多因素分析顯示LODDS分類是一個獨立預(yù)后因素。散點圖及Pearson相關(guān)性分析顯示淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目與淋巴結(jié)獲取總數(shù)呈明顯的正相關(guān)，而LODDS與淋巴結(jié)獲取總數(shù)無明顯相關(guān)性。在每個pN分期的患者中，不同LODDS分層間的預(yù)后差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義，而每個LODDS分類中，不同pN分期間的生存率均無明顯差異。
　　 結(jié)論：腫瘤大小是胃癌的可靠預(yù)后指標(biāo)，是對臨床分期的