顆粒酶B基因mRNA在心臟移植急性排斥反應(yīng)期的表達(dá).pdf

1、背景與目的：心臟移植已成為治療終末期心臟病的最主要的行之有效的方法，雖然已廣泛應(yīng)用如環(huán)孢素A、FK-506、硫唑嘌呤等免疫抑制藥物，但心臟移植術(shù)后的主要并發(fā)癥仍是排斥反應(yīng)，而急性排斥反應(yīng)是排斥反應(yīng)中最常見的一種類型。治療的關(guān)鍵在于如何早期確定急性排斥反應(yīng)的嚴(yán)重程度以確定是否需用免疫抑制藥物，在移植物造成細(xì)胞性損傷前逆轉(zhuǎn)排斥反應(yīng)，而目前缺乏理想的特異性監(jiān)測(cè)及診斷方法。同種異體移植的急性免疫排斥反應(yīng)是由多種細(xì)胞因子、效應(yīng)細(xì)胞間復(fù)雜相互作用的

2、結(jié)果.其中細(xì)胞免疫應(yīng)答是急性移植排斥的主要原因。細(xì)胞毒性T細(xì)胞(cytotoxicTlymphocyte，CTL)是主要的效應(yīng)細(xì)胞。現(xiàn)代移植免疫學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，在CTL殺傷供體細(xì)胞的過程中，穿孔素(perforin,PF)與顆粒酶(granzyme,Gzm)起了重要作用。本試驗(yàn)通過建立改良的Ono大鼠心臟腹腔異位移植模型，應(yīng)用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶聯(lián)反應(yīng)(reversetranscriptase-polymerasechainreactionR

3、T-PCR)動(dòng)態(tài)檢測(cè)在移植排斥反應(yīng)過程中，心肌組織與外周血中的顆粒酶B基因mRNA的表達(dá)，以探討顆粒酶B基因mRNA表達(dá)水平對(duì)心臟移植急性排斥反應(yīng)的診斷價(jià)值。 方法：用成年清潔級(jí)近交封閉群雄性大鼠，250～300克，建立改良的Ono式大鼠腹腔異位心臟移植模型。設(shè)A組：Wistar到Wistar,為同系移植對(duì)照組；B組：SD到Wistar，為同種移植試驗(yàn)組，每組35只。各組分別在術(shù)后1、3、5、7、9天抽取下腔靜脈血進(jìn)行半定量RT

4、-PCR，采集移植心臟進(jìn)行半定量RT-PCR及組織病理學(xué)檢查，檢測(cè)顆粒酶B基因mRNA和急性排斥反應(yīng)。 結(jié)果：1.在B組心肌組織中，各時(shí)間點(diǎn)均檢測(cè)到了顆粒酶B基因mRNA的表達(dá)，其表達(dá)隨著排斥反應(yīng)程度的升高持續(xù)升高，至術(shù)后第9天達(dá)到高峰，各時(shí)間點(diǎn)之間存在顯著性差異(P＜0.05)。而A組顆粒酶B基因mRNA持續(xù)呈低水平表達(dá)，各時(shí)間點(diǎn)之間的比較無顯著性差異(P＞0.05)。各時(shí)間點(diǎn)A組與B組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(第1天P＜0.

5、05，第3、5、7、9天P＜0.01)。 2.B組外周血中，術(shù)后第一天亦可檢測(cè)到少量顆粒酶B基因mRNA的表達(dá)，且隨著排斥反應(yīng)程度的升高，其表達(dá)逐漸上升，至術(shù)后第9天達(dá)到高峰，各時(shí)間點(diǎn)之間存在顯著性差異(P＜0.05)。A組顆粒酶B基因mRNA始終呈低水平表達(dá)，各時(shí)間點(diǎn)之間無顯著性差異(P＞0.05)。B組與A組相比，術(shù)后第一天組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，此后隨著反應(yīng)程度的加重，3、5、7、9天均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.

6、01)。 3.A組在術(shù)后1-9天，移植心肌組織結(jié)構(gòu)基本正常，各時(shí)間點(diǎn)心肌病理變化較一致，明顯輕于B組。僅有少量單核細(xì)胞及淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。B組在術(shù)后第1天，僅見心外膜下有少量淋巴細(xì)胞及單核細(xì)胞浸潤(rùn)，心肌細(xì)胞無壞死。第3天心外膜下浸潤(rùn)細(xì)胞增多，心內(nèi)膜下及心肌膜心肌間質(zhì)出現(xiàn)單核細(xì)胞及淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，間質(zhì)充血水腫。心肌細(xì)胞無壞死。第5天心肌各層均見大量單核細(xì)胞及淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，呈多灶性分布。此時(shí)可見個(gè)別心肌細(xì)胞呈凝固性壞死。第7天心肌各層大量

7、單核細(xì)胞及淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，心肌間質(zhì)充血水腫?？梢娸^多的心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞，變性壞死。術(shù)后第9天心肌全層彌漫浸潤(rùn)單核細(xì)胞及淋巴細(xì)胞，心肌間質(zhì)出血，大量心肌細(xì)胞呈凝固性壞死。B組與A組相比，1、3天的心肌組織病理學(xué)改變無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，而5、7、9天的組織改變有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。 結(jié)論：1.大鼠心臟移植急性排斥反應(yīng)的組織病理學(xué)改變主要表現(xiàn)包括：淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的浸潤(rùn)、心肌間質(zhì)充血水腫以及心肌細(xì)胞壞死。 2