抑制JNK1磷酸化對糖尿病大鼠心肌細(xì)胞TRPC6基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的
　　 近年來,流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn),隨著人們生活水平的提高和生活方式的改變,世界糖尿病患者數(shù)量飛速增長,至2005年全球糖尿病患者已高達(dá)3億人,我國是人口大國,糖尿病患者更是高達(dá)9240萬,防控形勢十分嚴(yán)峻。究其原因,目前認(rèn)為有兩點(diǎn):第一,糖尿病促進(jìn)動脈粥樣硬化的進(jìn)展,容易發(fā)展為冠狀動脈、腦動脈和周圍動脈粥樣硬化,使心肌梗死、腦卒中和下肢動脈閉塞的可能性增加,從而增加死亡的風(fēng)險(xiǎn)。第二,高血糖直接影響心肌和血管內(nèi)皮細(xì)胞,導(dǎo)致體內(nèi)

2、代謝紊亂及心臟的結(jié)構(gòu)和功能改變,最后發(fā)生心力衰竭甚至死亡,即糖尿病心肌病(DCM)。DCM最早在1972年由Ruberler等提出,研究發(fā)現(xiàn)有4名糖尿病患者在冠狀動脈正常的情況下發(fā)生了心衰,提出了糖尿病心肌病的概念,此后迅速成為臨床和基礎(chǔ)研究的熱點(diǎn)。本研究通過建立糖尿病心肌病模型,觀察抑制JNK1對TRPC6的表達(dá)的影響,探究JNK1→TRPC6→Ca2+-NFAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路引起糖尿病心肌病的可能分子信號機(jī)制。
　　 方法

3、r>　　 中國醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物部提供SPF級SD大鼠60只,隨機(jī)分成糖尿病模型組(A組)與干預(yù)組(B組)和對照組(C組),每組20只。正常飼養(yǎng)1w后,禁食24h,期間自由飲水,將鏈脲佐菌(STZ)溶液按60mg·kg-1STZ一次性左下腹腔注射實(shí)驗(yàn)組,對照組注射等量枸椽酸緩沖液。72h后檢測血糖、尿糖情況,以空腹血糖＞11.1mmol/L,非空腹血＞16.7mmol/L,尿糖定性≥+++,動物多飲、多食和尿量增加者確定為DM模型。用藥

4、方案:B組給藥SP600125試劑(JNK1特異性抑制劑)5mg·kg-1·d-1腹腔注射,C組、A組給予等量溶媒。所有大鼠在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間均喂標(biāo)準(zhǔn)飲食,自由飲水,不應(yīng)用胰島素,整個(gè)實(shí)驗(yàn)觀察8周,處死取材;對大鼠心肌行HE染色,電鏡觀察心肌超微結(jié)構(gòu),心肌細(xì)胞免疫組化檢測JNK1、p-JNK1和TRPC6的表達(dá),Real-Time PCR檢測JNK1 mRNA和TRPC6 mRNA的表達(dá)。所有結(jié)果用SPSS17.0 for windows軟

5、件統(tǒng)計(jì)分析。
　　 結(jié)果
　　 與C組相比,A組及B組血糖明顯升高(p＜0.01)、體重明顯降低(p＜0.01);A組及B組血糖無明顯差異;B組體重高于A組(p＜0.05);A組及B組左室重、左室指數(shù)、心體比、明顯高于C組(p＜0.01,p＜0.01,p＜0.01),HE染色可見正常大鼠心肌排列整齊,橫紋肌清晰,A組細(xì)胞排列紊亂,有局灶性壞死,干預(yù)后有所改觀。各組圖片使用顯微圖象分析系統(tǒng)(Meta MorP/DP10/B

6、X41)進(jìn)行光密度值分析,結(jié)果顯示,A組JNK1、TRPC6平均光密度值(MOD)明顯高于對照組,B組較A組表達(dá)減少,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。Real-Time PCR結(jié)果顯示:正常組大鼠心肌少量表達(dá)JNK1 mRNA和IRPC6 mRNA,而糖尿病組大鼠心肌則顯著升高,是對照組的6倍和8倍(p＜0.01)。干預(yù)后,明顯下調(diào)大鼠心肌JNK1 mRNA和TRPC6 mRNA的表達(dá)水平。
　　 結(jié)論
　　 1、