核轉(zhuǎn)錄因子NAC1在腫瘤發(fā)生和發(fā)展中的作用和機(jī)制研究-對(duì)自噬和細(xì)胞衰老的調(diào)控作用.pdf

1、目的:
　　 研究核轉(zhuǎn)錄因子NAC1(伏隔核1，Nucleus accumbens-1)對(duì)腫瘤細(xì)胞治療敏感性的調(diào)控機(jī)制，以及對(duì)腫瘤形成和惡性進(jìn)展的影響。
　　 方法:
　　 采用細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、藥理學(xué)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)學(xué)等多種方法檢測(cè):
　　 1) NAC1對(duì)細(xì)胞自噬的調(diào)控作用以及NAC1介導(dǎo)的自噬對(duì)臨床化療藥物順鉑敏感性的影響;
　　 2）NAC1對(duì)細(xì)胞衰老的調(diào)控作用以及NAC1介導(dǎo)的細(xì)胞衰老逃

2、逸對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖，以及細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化和致瘤性的影響。
　　 結(jié)果:
　　 本研究發(fā)現(xiàn):
　　 1）NAC1是一個(gè)全新的自噬調(diào)節(jié)因子。在順鉑治療下，NAC1可引起自噬相關(guān)蛋白LC3Ⅱ(microtubule-associated protein1 light chain 3)水平上調(diào)、p62蛋白（它可參與自噬途徑降解）水平下調(diào)、GFP-LC3熒光顆粒數(shù)以及細(xì)胞自噬小體增加。抑制NAC1介導(dǎo)的自噬激活可增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)順

3、鉑的敏感性，表現(xiàn)為細(xì)胞活力減弱、凋亡細(xì)胞數(shù)增加，以及凋亡相關(guān)蛋白—剪切的Caspase 3和PARP水平上調(diào)。本研究揭示，NAC1介導(dǎo)的自噬激活是通過調(diào)控高遷移率族蛋白HMGB1的表達(dá)、易位和釋放而實(shí)現(xiàn)的。NAC1可促進(jìn)順鉑治療產(chǎn)生的HMGB1從胞核到胞漿的易位以及HMGB1從胞漿向胞外的釋放。在順鉑治療下，沉默HMGB1的表達(dá)則可明顯抑制NAC1介導(dǎo)的自噬激活。
　　 2)NAC1亦是一個(gè)全新的細(xì)胞衰老抑制因子。NAC1可逃逸

4、輻射和致癌因子誘導(dǎo)的細(xì)胞衰老發(fā)生，其表現(xiàn)為SA-β-gal陽性細(xì)胞數(shù)減少、細(xì)胞增殖能力和細(xì)胞克隆形成數(shù)增加、細(xì)胞周期蛋白依賴激酶抑制蛋白-p21表達(dá)下調(diào)。RT-PCR和熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)結(jié)果顯示，NAC1通過調(diào)控ΔNp63（DeltaNp63為p63蛋白的主要表達(dá)形式）轉(zhuǎn)錄來逃逸輻射和致癌因子誘導(dǎo)的細(xì)胞衰老，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖，從而有利于致癌因子Ras誘導(dǎo)的MEF細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化，并在動(dòng)物模型中促發(fā)腫瘤的形成。
　　 結(jié)論: