C2orf40在乳腺癌中的作用及作用機(jī)制研究.pdf

1、背景：
　　 乳腺癌是一種常見(jiàn)的女性惡性腫瘤，并為女性癌癥死亡的主要病因，最新統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示乳腺癌占所有女性癌癥病例數(shù)的23％和癌癥死亡數(shù)的14％。然而，乳腺癌發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)歸的遺傳學(xué)、表觀遺傳學(xué)機(jī)制遠(yuǎn)未完全揭示，造成防治上的困難。抑癌基因失活及功能紊亂是導(dǎo)致乳腺癌發(fā)生發(fā)展的主要病理因素之一。我們前期研究觀察到候選抑癌基因C2orf40的表達(dá)與乳腺癌預(yù)后密切相關(guān)，且C2orf40的失活源于C2orf40啟動(dòng)子的超甲基化，但C2orf

2、40在乳腺癌中的作用及其機(jī)制尚不清楚。因此，進(jìn)一步探索研究抑癌基因C2orf40功能與乳腺癌發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)歸的關(guān)系，揭示乳腺癌發(fā)生發(fā)展的精確機(jī)制，對(duì)設(shè)計(jì)合理治療藥物、判斷預(yù)后、進(jìn)一步提高我國(guó)乳腺癌的治療水平具有重要意義。
　　 目的：
　　 1、建立穩(wěn)定表達(dá)C2orf40和C2orf40基因沉默的乳腺癌細(xì)胞系，為研究C2orf40的功能提供細(xì)胞研究模型。
　　 2、觀察C2orf40對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影

3、響。
　　 3、初步探討C2orf40在乳腺癌中發(fā)揮生物學(xué)作用的機(jī)制。
　　 方法：
　　 1、細(xì)胞系的建立:應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)法將pBabe-puro-C2orf40、pBabe-puro真核表達(dá)載體感染人乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231和BT549,pSuper-puro-sh.C2orf40.A和pSuper-puro-sh.C2orf40.B兩種C2orf40基因沉默質(zhì)粒以及空白質(zhì)粒pBabe-puro感

4、染人乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-468，經(jīng)嘌呤霉素篩選得到C2orf40穩(wěn)定表達(dá)和C2orf40基因沉默的乳腺癌細(xì)胞系，反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈法(RT-PCR)法驗(yàn)證C2orf40在感染后的MDA-MB-231、BT549和MDA-MB-468乳腺癌細(xì)胞系中的表達(dá)。
　　 2、C2orf40對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖和遷移的影響:采用四氮唑藍(lán)鹽(MTT)法和克隆集落形成實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞體外增殖情況;采用劃痕法、Matrigel基底膜侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移

5、、侵襲能力。
　　 3、C2orf40影響細(xì)胞生物學(xué)行為的可能機(jī)制:通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期，用qPT-PCR和WesternBlot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)UBE2C的表達(dá)情況，探討C2orf40與UBE2C的關(guān)系。
　　 結(jié)果：
　　 1、穩(wěn)定感染C2orf40基因的MDA-MB-231和BT549細(xì)胞中C2orf4o基因穩(wěn)定表達(dá);C2orf40基因沉默的MDA-MB-468細(xì)胞中C2orf40基因表達(dá)降低，表明細(xì)胞系構(gòu)建

6、成功。
　　 2、C2orf40高表達(dá)的乳腺癌細(xì)胞其生長(zhǎng)速度減慢，克隆形成能力降低，細(xì)胞的遷移性和侵襲性被抑制;基因沉默C2orf40的乳腺癌細(xì)胞其生長(zhǎng)速度加快，克隆形成能力、細(xì)胞的遷移和侵襲能力均增強(qiáng)。
　　 3、C2orf40高表達(dá)能夠?qū)⒓?xì)胞阻滯在G2/M期，可能與其下調(diào)UBE2C的表達(dá)有關(guān)。
　　 結(jié)論：
　　 1、C2orf40能夠明顯抑制乳腺癌的細(xì)胞增殖，遷移和侵襲能力。
　　 2、C2